有关川崎病并发感染患儿TregTh17细胞、免疫功能的变化与临床意义毕业论文写作资料-论文写作网

简介:该文是川崎病和健康相关研究生毕业论文范文和免疫类研究生毕业论文范文.

川崎病和健康论文范文

[摘要] 目的探究川崎病（KD）并發感染患儿Treg/Th17细胞、免疫功能的变化及临床意义. 方法选取2016年1月～2018年6月于安徽省儿童医院就诊的KD并发感染患儿100例作为观察组,选择同期诊断为KD但无并发感染患儿37例作为对照组.利用酶联免疫吸附法检测两组患儿炎症因子指标,采用流式细胞术检测调节性T细胞（Treg）、辅助性T细胞17（Th17）、CD3+、CD4+、CD8+以及自然杀伤（NK）细胞比例变化,同时利用免疫比浊法测定免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）及免疫球蛋白A（IgA）. 结果观察组白细胞个数、血小板计数（PLT）、降钙素原、中性粒细胞百分比数、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）及白细胞介素8（IL-8）含量明显均高于对照组（P < 0.05）;流式细胞术结果示,观察组Treg、Th17细胞百分比及Treg/Th17比值明显高于对照组（P < 0.05）;免疫比浊法与流式细胞术结果示,观察组IgG、IgA、IgM、CD4+、NK细胞含量明显高于对照组（P < 0.05）,而CD3+、CD8+及CD4+/CD8+含量明显低于对照组（P < 0.05）. 结论 KD并发感染患儿炎症较为强烈,Treg/Th17细胞、免疫功能更为紊乱,这些指标变化对于临床诊断KD并发感染患儿具有指导意义.

[关键词] 川崎病;并发感染;Treg/Th17细胞;免疫功能;变化;临床意义

[中图分类号] R725.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2020）02（b）-0091-04

Changes and clinical significance of Treg/Th17 cells and immune function in children with Kawasaki disease complicated with infection

RAO Xiaohong TONG Wenjuan CHEN Dingding

Department of Emergency Internal Medicine, Anhui Provincial Children′s Hospital, Anhui Province, Hefei 230051, China

[Abstract] Objective To investigate the changes and clinical significance of Treg/Th17 cells and immune function in children with Kawasaki disease （KD） complicated with infection. Methods From January 2016 to June 2018, 100 children with KD complicated with infection in Anhui Provincial Children′s Hospital were selected as observation group, and 37 children diagnosed as KD but not complicated with infection were selected as control group. The inflammatory factors indexes were measured by enzyme linked immunosorbent assay kit and regulatory T cells （Treg）, helper T cells 17（Th17）, CD3+, CD4+, CD8+ and the proportion of natural killer （NK） cells were detected by flow cytometry. At the same time, immunoglobulin M（IgM）, immunoglobulin G（IgG） and immunoglobulin A（IgA） were determined by immunoturbidimetry. Results The number of leukocytes, platelets, calcitonin, percentage of central granulocytes, hypersensitive C-reactive protein （hs-CRP）, tumor necrosis factor-α （TNF-α）, interleukin-6 （IL-6） and interleukin-8 （IL-8） in the observation group were significantly higher than the control group （P < 0.05）. The results of flow cytometry showed that the percentage of Treg, Th17 cells and the ratio of Treg/Th17 in the observation group were significantly higher than the control group （P < 0.05）. The results of immunoturbidimetry and flow cytometry showed that the contents of IgG, IgA, IgM, CD4+ and NK cells in the observation group were significantly higher than the control group （P < 0.05）, while the contents of CD3+, CD8+ and CD4+/CD8+ were significantly lower than the control group （P < 0.05）. Conclusion The inflammation of children with KD complicated with infection is strong, Treg/Th17 cells and immune function are more disordered. The changes of these indexes he guiding significance for the clinical diagnosis of KD complicated with infection.

[Key words] Kawasaki disease; Complicated with infection; Treg/Th17 cells; Immune function; Change; Clinical significance

川崎病（KD）又名皮肤黏膜淋巴综合征,是一种全身性血管炎症病变综合征,多发于5岁以下儿童,近年来,该病发病率呈现逐年增高的趋势[1].KD发病较为复杂,冠状动脉损伤是KD患儿较为常见的并发症,严重者可能导致心源性猝死.目前KD是儿童获得性心脏病的主要原因[2],其导致儿童发生心血管病变的概率高居首位,但是其发病机制至今尚未明确阐明[3].目前有研究猜测,免疫系统功能紊乱与KD发生、发展密切相关[4],CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）、辅助性T细胞17（Th17）是组成细胞免疫的重要部分,Treg能够明显抑制炎性反应,而Th17则能够不断促进炎性反应,Treg/Th17比例的变化能够体现出T细胞免疫功能的变化[5].KD患儿发病常常伴有EB病毒、肺炎支原体等并发感染,KD患儿并发感染常伴有多种免疫功能改变与紊乱[6-7].本文对KD并发感染患儿Treg/Th17细胞、免疫功能的变化进行探究,具体研究如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2018年6月于安徽省儿童医院（以下简称“我院”）就诊的患儿,纳入标准：①符合《川崎病诊断指南》[8];②经病原学检测确诊为病毒感染;③年龄4个月～14岁;④治疗前未使用影响免疫系统功能类药物;⑤患者及其家属同意参与本研究,并签署知情同意书.排除标准：①患有其他免疫系统疾病;②合并有严重心肾疾病;③不配合治疗者.观察组患儿100例,其中男70例,女30例;年龄4个月～8岁,平均（1.76±1.31）岁;并发肺炎链球菌感染38例,EB病毒感染27例,衣原体感染10例,沙门菌感染11例,其他病毒感染14例.选择同期于我院诊断为KD但无并发症感染患者37例作为对照组,其中男22例,女15例;年龄5个月～6岁,平均（1.99±1.42）岁.两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P > 0.05）,具有可比性.本研究通过我院医学委员会审核批准.

1.2 观察指标及检测方法

1.2.1 炎症因子检测两组患儿入院后确诊KD后予丙种球蛋白及对症治疗,如存在感染,给予相应抗生素或抗病物治疗.治疗前,清晨空腹状态下收集两组患儿的静脉血,检测白细胞计数、血小板计数（PLT）、降钙素原、中性粒细胞百分比、红细胞沉降率（ESR）以及超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平变化.同时取200 μL血液,4000 g离心10 min后取血清,离心半径为11.5 cm,利用酶联免疫吸附实验试剂盒检测两组患儿血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）以及白细胞介素8（IL-8）水平,操作严格按照说明书进行（上海通蔚生物科技有限公司,生产批号：20151207）.

1.2.2 Treg/Th17比例检测患儿在空腹状态下,抽取5 mL静脉血,并将其储存于肝素抗凝真空采血管中,放置于-80℃冰箱保存.Treg检测：取100 μL全血,加入20 μL APC抗人CD25抗体和FITC抗人CD4抗体[英潍捷基（上海）贸易有限公司,生产批号：20150416、20150622],混合均匀后避光反應10 min,将反应的混合液利用离心机2500 g离心5 min,离心半径为11.5 cm,将上清液弃掉后加入500 μL的PBS缓冲液,震荡混合均匀,再次按照2500 g转速离心5 min后进行固定穿孔,使用Foxp3抗体过夜孵育,进行标记.Th17检测：将采集的静脉血按照4000 g转速离心5 min,离心半径为11.5 cm,分离出外周血单个核细胞,选取1×107个外周血单个核细胞将其培养于24孔板中,往其中添加50 ng/mL的聚丙烯酸甲酯（PMA）、10 mg/mL布雷非德菌素A以及1 mmol/L的离子霉素（美国Sigma公司,生产批号：20141125、20150217、20151026）,将上述样品混合均匀后,共同培养在含10%加热灭火小牛血清的RPMI-1640培养基[英潍捷基（上海）贸易有限公司,生产批号：20151027]中,进行共同刺激,培养5 h后,利用FITC抗-CD4抗体进行标记20 min后进行穿孔、固定,之后再使用PE-抗人IL-17A抗体[英潍捷基（上海）贸易有限公司,生产批号：20150613]在胞内进行标记.流式细胞术采用型号为Epics XL-MCL的流式细胞仪（美国贝格曼公司）,激发光波长大小为488 nm.

1.2.3 免疫功能指标检测免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）及免疫球蛋白A（IgA）检测：清晨患儿空腹状态下抽取静脉血2 mL,利用免疫比浊法进行检测,检测仪器为BNProspec型全自动蛋白分析仪（德国西门子公司）,严格遵照仪器操作说明进行,仪器所用试剂为仪器配套原装试剂.免疫细胞检测：利用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+以及自然杀伤（NK）细胞,具体操作同“1.2.2”.

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析,计量资料用均数±标准差（x±s）表示,两组间比较采用t检验;计数资料用率表示,组间比较采用χ2检验.以P < 0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 两组患儿炎症因子比较

观察组白细胞个数、PLT、降钙素原、中性粒细胞百分比数、hs-CRP、TNF-α、IL-6及IL-8含量明显高于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）;两组ESR差异无统计学意义（P > 0.05）.见表1.

2.2 两组患儿Treg/Th17比较

观察组Treg、Th17细胞百分比及Treg/Th17比值明显高于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）.见表2.

2.3 两组患儿免疫功能指标比较

观察组IgG、IgA、IgM、CD4+、NK细胞含量明显高于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）,而CD3+、CD8+及CD4+/CD8+含量观察组明显低于对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）.见表3.

3 讨论

KD是一种多发于5～6岁儿童异常免疫反应产生的全身血管性炎症,并且男孩发病率远高于女孩[1].KD发病常伴随冠状动脉瘤、冠状动脉扩张等多种并发症,严重者可能导致心力衰竭、心肌梗死的发生[3].KD严重影响到婴幼儿的生命安全,但是其病因和发病机制至今尚未阐明,该病尚未有明确诊断手段与特异性的生物标志物,对于患儿早期疾病的诊断与治疗带来一定的困难.研究表明,儿童的这种异常免疫反应可能与T细胞的异常启动密切相关[9].Treg细胞是一类具有免疫抑制功能的T细胞亚群,能够将自身免疫耐受维持在某个水平,抑制自身免疫,在自身免疫疾病的发生、发展等过程中发挥着重要作用[10].Th17细胞是一类CD4+辅助性T细胞亚群,其在自身免疫反应中起到促进炎症因子的作用[11],目前Treg/Th17细胞在诱导多种免疫疾病发生、发展过程中起到重要作用,其比例的变化在某些程度上能够指示疾病的进程[12].

本研究结果显示观察组炎症因子各项指标高于对照组,提示KD并发感染对患儿机体免疫伤害更大,释放大量炎症因子.机体内TNF-α大量出现,诱导表达血管内皮细胞,使细胞与细胞之间的黏附分子大量增加,对血管内壁造成较大的免疫损伤[13];IL-6和IL-8能够增强免疫反应,导致患儿血管炎症的出现[14].白细胞个数、PLT、中性粒细胞百分比数、hs-CRP是儿科检测感染的主要指标[15],降钙素原能够早期明确检测出患儿并发的感染和非感染性疾病,还有助于判断患儿疾病的预后状况,帮助医生调整抗生素的治疗方法[16].陈璐[17]的研究结果与本研究结果相似,提示KD并发感染患儿C反应蛋白、中性粒细胞数均高于未感染组,并且感染组患儿冠状动脉伤害较大.本研究结果显示,观察组Treg、Th17细胞百分比及Treg/Th17比值明显高于对照组,提示患儿机体内存在Treg/Th17的平衡与失衡,KD并发感染过程中Treg、Th17在患儿体内相互作用、相互调节.Treg和Th17细胞之间的平衡性是自身免疫疾病、神经系统性炎性反应等多种疾病的起因,Th17细胞能够分泌释放大量的白细胞介素-17（IL-17）,进而导致下游释放大量的炎症因子,造成组织器官的损伤,起到促炎的作用[11],而Treg细胞则通过一系列的直接或间接作用,起到抑炎的作用[10],本研究中观察组Treg/Th17比例明显升高,说明Treg与Th17参与了KD的发生,并且两者与炎症因子的变化密切相关.本研究结果发现,观察组IgG、IgA、IgM、CD4+、NK细胞含量明显升高,而CD3+、CD8+及CD4+/CD8+含量明显降低,提示KD并发感染与体液免疫与细胞免疫密切相关.IgG、IgA、IgM等免疫球蛋白是体液免疫的重要免疫分子,在初级免疫反应中起着重要作用[18],其能够形成抗体,参与机体的免疫调节.CD4+能够促进细胞免疫与体液免疫,而CD8+則能够明显抑制该过程,CD4+/CD8+比值变化会导致细胞免疫失调,出现病理反应,CD4+与CD8+的平衡在自身免疫中也起到重要作用.孟庆祝等[19]研究表明KD感染肺炎支原体后细胞免疫与体液免疫发生紊乱,与本研究结果相似.KD合并感染患儿T细胞功能异常,T细胞被高活化后导致释放大量淋巴因子,淋巴因子进一步诱导B细胞分泌免疫球蛋白及其他的细胞因子,对血管造成炎性损伤.B细胞被活化后形成的抗体,对机体免疫起到调节作用,激活后的B细胞能够发挥更强的免疫效应,更快地杀灭病原菌[20].对细胞免疫与体液免疫相关因子的检测,分析其变化对于KD合并感染患儿治疗具有积极刺进作用.

综上所述,KD并发感染患儿体液免疫与细胞免疫更加紊乱,炎症因子反应更加强烈,两者可能参与KD的病理过程.对患儿体液免疫、细胞免疫及炎症相关因子的检测,有助于患儿的早期诊断与治疗.

[参考文献]

[1] 王航政.丙种球蛋白与阿司匹林联合丹参注射液治疗川崎病临床研究[J].国际中医中药杂志,2016,38（12）：1083-1086.

[2] Lorenzoni RP,Choi J,Choueiter NF,et al. Predictors of inadequate initial echocardiography in suspected Kawasaki disease：Criteria for sedation [J]. Congenit Heart Dis,2018,13（3）：470-475.

[3] 况虹宇.氧化应激与川崎病冠状动脉病变[J].国际儿科学杂志,2018,45（2）：84-87.

[4] 汪希珂,刘晓英,吴悦,等.T细胞免疫及细胞因子在川崎病不同时期表达变化的研究[J].贵州医药,2018,42（3）：276-280.

[5] Lan YT,Fan XP,Fan YC,et al. Change in the Treg/Th17 cell imbalance in hepatocellular carcinoma patients and its clinical value [J]. Medicine,2017,96（32）：7704-7710.

[6] 温颖.儿童川崎病合并肺炎支原体感染的耐药性及抗菌药物治疗分析[J].中国医药指南,2018,16（12）：156-157.

[7] 郭沙沙,刘亚轻,朱凯,等.川崎病与EB病毒关系的meta分析[J].现代预防医学,2018,45（11）：166-169.

[8] 罗丽萍,王忠,张望强,等.川崎病诊断指南[J].农垦医学,2005,27（1）：43-44.

[9] 郑丽君,张淑平,吴梦.丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4～+CD25～+调节T细胞与淋巴细胞亚群分布的影响[J].免疫学杂志,2017,33（11）：991-995.

[10] 胡子龍,何长征,邢晓伟,等.CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤免疫中的研究进展[J].川北医学院学报,2018, 33（1）：134-137.

[11] 陈晨,王明永.Th17细胞在自身免疫性疾病中的研究进展[J].中国免疫学杂志,2018,34（7）：135-140,147.

[12] 顾惠琴,孟政杰.Th17/Treg平衡在自身免疫性疾病中的研究进展[J].交通医学,2017,31（2）：124-127.

[13] 王刚,孙耕耘.膜突蛋白磷酸化在大鼠肺微血管内皮细胞损伤中的作用机制探讨[J].中华危重病急救医学,2017,29（9）：825-829.

[14] 黄静,魏萍.中西医结合治疗耐药性儿童支原体肺炎的疗效观察及对血清IL-6、IL-8、IL-10的影响[J].中国妇幼保健,2017,32（14）：3220-3222.

[15] 王帮,刘秀香,潘琦琦,等.有感染高危因素的孕妇白细胞数、中性粒细胞数、C反应蛋白与新生儿相应指标的相关性分析[J].中国当代医药,2018,25（4）：122-125.

[16] 李凡.血清降钙素原的检测在儿科感染性疾病中的应用价值研究[J].临床研究,2017,25（12）：87-88.

[17] 陈璐.肺炎支原体感染与川崎病及冠状动脉病变的关系[J].临床荟萃,2017,32（1）：71-73.