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第一篇ACCA论文范文参考：油茶ACCase基因的克隆及功能研究
油茶(Camellia oleifera Abel)是中国原产且最为重要的木本食用油料树种.提高油茶种子含油率是今后很长一段时间油茶育种的重大目标和技术难关,而且通过常规育种技术难以实现.为了实现这个宏大目标,加速油茶品种改良进程,一个可行的方法就是关注参与脂肪酸和油脂合成的关键酶,克隆控制油茶种子油含量的关键基因,并通过分子育种的方法对现有品种实施遗传改良,达到提高油茶种子油含量的目的.异质型乙酰辅酶A羧化酶是各种脂肪酸从头合成和油脂合成的限速酶和关键酶,它由生物素羧化酶(BC)、生物素羧基载体蛋白(BCCP)、α－羧基转移酶(α-CT)和β－羧基转移酶(β-CT)4个亚基组成.本研究以‘华硕’、‘华金’、‘华鑫’、‘衡东号31’、‘衡东65’和‘衡东17号’等6个品种以及‘华硕’的嫩叶、茎段、花芽、雄蕊、雌蕊、子房、4月份幼果、7月份幼果以及成熟种子为材料,从油茶中克隆了ACCase4个亚基的cDNA序列和基因组序列,通过多重RT-PCR与实时荧光定量PCR研究了它们在油茶种子不同发育阶段及不同组织器官中的表达规律,并在拟南芥中研究它们的过量表达和RNA干扰对油脂合成的影响.本研究的主要结果如下：
1.油茶ACCase4个亚基基因的cDNA克隆.以‘华硕’成熟种子总RNA反转录的cDNA第一链为模板,采用简并RT-PCR、5’和3’RACE等技术克隆了油茶ACCase4个亚基的cDNA,分别命名为Co-accB(编码BCCP)、Co-accC(编码BC)、Co-accA(编码α-CT)和Co-accD(编码β-CT).(1)油茶ACCase亚基基因accB的全长cDNA为1153bP,编码272个氨基酸.并具有前体肽以及与其它三个亚基结合形成ACCase复合体的成熟肽,其前体肽的剪切位点可能位于Ser-64与Ala-65之间；它含有生物素(酰)化模块CIIEAMNEE及生物素化位点Lys.(2)油茶BC亚基基因accC的全长cDNA大小为1638bP,含有1602bP的开放读码框,编码533个氨基酸.它具有前体肽以及与其它三个亚基结合形成ACCase的成熟肽.其前体肽剪切位点可能位于Arg46-Va147之间.并具有BC-1、ATP结合位点、BC-2以及生物素酰化位点四个亚结构域.(3)油茶ACCase亚基基因accA的部分cDNA序列大小为1293bP,编码430个氨基酸.它具有保守的氨基酸序列,并含有乙酰辅酶A结合域.(4)在克隆ACCaseβ-CT亚基基因accD时,获得了一个长度为2574bP的序列,该序列包括1,5－二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶大亚基基因rbcL (ribulose1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit)(部分序列)、rbcL-accD以及accD(全长cDNA序列)三部分.其中,accD的ORF为1530bP,编码510个氨基酸.它含有一个锌指结构和五个保守序列.在其ORF推导的氨基酸序列中含有乙酰辅酶A、羧基生物素结合位点以及位于它们之后的羧基转移酶催化位点等结构域.rbcL、rbcL-accD基因间隔及accD的核苷酸序列与二十多种山茶属植物对应叶绿体基因的核苷酸序列具有高度一致性,这反映了它们具有较近的亲缘关系.油茶ACCase这4个亚基基因推导的氨基酸序列与棉花(Gossypium hirsutum)、花生(Arachis hypogaea)和大豆(Glycine max)等油料植物以及大肠杆菌ACCase对应亚基基因的氨基酸序列具有较高的一致性,属于异质型ACCase基因；它们具有完成ACCase羧化乙酰CoA两个半反应以及亚基间相互结合的结构域；核编码基因accA、accB和accC前体肽剪切后的成熟肽与位于质体的p-CT亚基结合,最终形成具有ACCase活性的多亚基异质型复合体.
2.油茶ACCase BC和p-CT亚基基因基因组DNA的克隆.以油茶‘华硕’叶片总DNA为模板,根据accC和accD的cDNA序列分别设计引物,采用降落PCR技术,获得了包括它们基因编码区(分别为1602bP和1533bp)在内的基因组序列.其中,accC的基因组序列长度为1638bp；rbcL、rbcL-accD以及accD的基因组序列大小为2222bp；与它们的对应cDNA序列比较后确认这两个基因均没有内含子.accD上游启动区为约529bP,没有PEP启动子位点,含有NEP型启动子元件,其5’端UTR部分含有-10启动子元件、CAAT BOX1、YACT、napA E-box、 GATA box和DOFCOREZM等位点,并可能与psal,ycf4、cemA和petA等形成操纵子,在NEP型启动子控制下以多顺反子形式转录.在油茶基因组中存在于叶绿体或质体的p-CT亚基基因和存在于核基因组中的BC亚基基因可能作为‘小基因组’,在基因组进化过程中内含子逐渐被淘汰.所获得的accD基因组序列与cDNA序列存在着核苷酸差异,这可能与accD基因家族有关,也可能与基因组序列转录过程的RNA编辑现象有关.获得油茶ACCase两个BC和β-CT亚基基因组序列为油脂合成及油脂含量影响等研究提供了基因材料和理论依据.
3.油茶ACCase4个亚基基因转录水平上的表达模式研究.以‘华硕’等6个油茶优良品种的成熟种子以及‘华硕’嫩叶等不同组织器官和不同发育阶段的种子为材料,分别以它们的cDNA第一链为模板,从GAPDH、Actin1和UBC30等参照基因中选取GAPDH做为参照基因；在优化GAPDH与分别油茶ACCase4个亚基基因accA、accB、accC和accD同管扩增最佳反应体系和条件的基础上,研究了油茶ACCase4个亚基基因的表达模式,荧光定量PCR进一步证实和补充了实验结果.
(1)油茶accB基因在‘华硕’等6个不同含油率种子中的表达差异不十分明显；荧光定量PCR揭示油茶accB基因在‘衡东17号’、‘衡东65号’和‘华硕’转录水平较高.油茶accB基因在油茶‘华硕’雌蕊和成熟种子中的转录水平较高.
(2)油茶accC基因在‘华硕’等6个不同含油率种子中的转录水平差异较为明显,在‘衡东17号’和‘衡东65’中较多.它的转录水平与各品种含油率之间的相关性不十分明显.(3)油茶accA基因在油茶‘华金’表达量较多,在‘衡东31号’、‘衡东17号’和‘华鑫’种子中转录水平相似.其表达量与各品种含油率之间的相关性不明显.它在油茶‘华硕’成熟种子中的表达量最多,而在其它组织及种子发育过程中表达量较少.(4)油茶accD基因在‘华硕’等等不同含油率种子中转录存在着较大差异,在‘华鑫’中表达量最大.它的转录水平与部分油茶品种含油率之间有一定的相关性.它在油茶‘华硕’的叶片表达量和发育的种子中转录水平较高.
在油茶种子发育过程中,这4个ACCase基因转录量增多的趋势符合种子由花期到成熟,油脂合成量由小到多而进入高峰期,对脂肪酸需求逐渐增多；种子成熟后,油脂合成逐渐完成,对脂肪酸需求下降的要求.表明这4个ACCase基因转录与脂肪酸形成关系密切.我们的研究结果支持‘异质型ACCase的表达量对其活性和种子含油量至关重要,是种子含油率高低标志这个结论’以及',ACCase在决定油料作物含油率具有重要作用’这个假说.油茶异质型ACCase各亚基基因协调表达,在开花前(后)和种子成熟前后出现了两个转录高峰,只是前者不明显,后者却十分明显.另外,这4个基因在油茶组织器官中呈现出相似的转录水平,这与Ke等的结论相一致.本研究为我们从转录水平检测油茶ACCase亚基基因表达提供一种直观的方法.
4. ACCase亚基基因accC的过量表达和accA/accB/accC/accD的RNA干扰研究.构建了pC AMBIA1304-35S-accC植物表达载体,农杆菌介导转入哥伦比亚野生型拟南芥中,获得accC过量表达的转拟南芥T1和T2代抗性植株.利用Gateway技术,分别构建了异质型ACCase多亚基基因的干扰载体pJawohRNAi18-accA/accB/accC/accD,农杆菌介导转入哥伦比亚野生型拟南芥中分别了获得它们的T1代转拟南芥抗性植株.这为今后研究异质型ACCase基因在种子特异启动子作用下分别与4个亚基的两两组合融合、1个和3个组合融合或4个亚基融合构建ACCase过量表达载体,然后转到植物植株中检测它们的表达效果等研究提供理论准备和物质基础.
综上所述,本研究获得油茶ACCase4个亚基基因的cDNA序列和2个亚基基因组序列,分析了油茶ACCase4个亚基基因的结构特点、表达模式以及它们在脂肪酸和油脂代谢途径中的作用,为油茶品种评价和丰产栽培措施的调控提供了一种直观的检测方法.这将对今后提高油茶种子含油率,增加油茶单位面积产量和总产量以及油茶一些丰产栽培措施的应用提供理论依据,因而具有重要的理论价值和重大的应用价值.
第二篇ACCA论文样文：大肠杆菌生物素羧基载体蛋白对accBC操纵子转录的负调控作用
脂肪酸是细胞膜的关键组成成分之一,与各种生物体的生长与新陈代谢息息相关.脂肪酸及其衍生物在食品、医药、化工等各个领域也发挥不可或缺的作用.大肠杆菌作为一种模式微生物,具有清晰的遗传背景、对其基因操作的方法成熟,是研究脂肪酸代谢机制的理想载体.
细菌的脂肪酸合成酶与高等哺乳动物的有所不同,属于II型脂肪酸合成酶系.细菌的脂肪酸合成过程中每一步反应都由一种单独的酶催化,其合成过程以酰基载体蛋白（ACP）为载体.在大肠杆菌的脂肪酸合成途径中,乙酰辅酶A羧化酶(ACC)调控脂肪酸的合成.在此合成途径中,以重碳酸盐作为羧基来源,在ATP的参与下,乙酰辅酶A羧化酶负责催化乙酰辅酶A到丙二酰辅酶A合成反应.大肠杆菌中丙二酰辅酶A的合成过程是一个两步反应,反应的整个过程涉及到accABCD四种基因的表达产物的参与.反应的第一步是生物素羧基载体蛋白(BCCP,AccB)的生物素部分被羧化,此过程受到生物素羧化酶(BC, AccC)的催化；第二步反应是上述反应所形成的羧基从生物素羧基载体蛋白到乙酰辅酶A的转移,最终生成丙二酰辅酶A,此反应过程由AccA和AccD所组成的羧基转移酶催化.
大肠杆菌的脂肪酸合成途经常作为II型脂肪酸合成酶系的模板,用于脂肪酸代谢调控机制的研究.本研究将重点放在accBC操纵子在大肠杆菌脂肪酸合成体系中受到BCCP的负调控作用的机制上.
利用PCR方法,成功从大肠杆菌中扩增出accBC基因,长度约为3300bp.为了探究accB与/或accC基因的表达对accBC基因自身操纵子的转录是否产生影响,使accBC基因在accBC::lux融合（位于质粒pYHY98中）存在的情况下表达.对accBC启动子的转录融合研究表明,AccB与AccC的过量表达使融合报告的活性显著下降（p<,0.01）,说明accBC基因的过量表达对accBC操纵子的转录有明显的抑制作用；在对数中后期诱导AccB过量表达时,accBC::lux融合的活性没有受到显著影响.用含有accD的质粒转化菌体时发现,羧基转移酶（AccD）的过量表达对accBC::lux融合活性没有产生显著的影响.对AccB蛋白首先利用阿拉伯糖诱导其过量表达,accBC::lux的融合活性受到显著抑制,随后添加葡萄糖抑制AccB蛋白的继续表达,但accBC::lux融合活性受到的抑制没有得到解除.
利用IPTG对accB诱导表达40min后发现,accBC操纵子的转录受到AccB蛋白表达的抑制作用,几乎完全停止；含BCCP羧基末端87个氨基酸的蛋白过量表达的情况下,accBC操纵子的转录量没有明显的差异；Northern杂交结果表明,accB基因的表达产物是自身调节的细胞信号；AccB蛋白氨基末端的68个氨基酸过量表达的情况下,对accBC操纵子的转录明显具有不利影响.
将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的accB基因在大肠杆菌（ΔaccB）中表达.实验结果表明,虽然枯草芽孢杆菌AccB蛋白能互补大肠杆菌AccB蛋白的活性,但对大肠杆菌accBC基因转录的不具有负调控作用.将含有大肠杆菌AccB蛋白氨基末端44个氨基酸的片段与枯草芽孢杆菌AccB蛋白羧基末端的生物素酰化域组成嵌合蛋白,此蛋白既能互补大肠杆菌AccB蛋白的活性,又对大肠杆菌accBC操纵子的转录具有显著的负调控作用.对比大肠杆菌accA和accA/accB基因被敲除的两种情况发现,当accA与accB基因同时被敲除时,accBC操纵子的转录水平明显高于单独敲除accA基因时的水平.利用来自于三叶草根瘤菌（Rhizobium trifolii）的丙二酰辅酶A合成酶基因（matABC）可以使大肠杆菌不依赖于乙酰辅酶A羧化酶反应,绕过內源途径,利用外源途径合成丙二酰辅酶A,以5%蔗糖作为渗透压稳定剂时,菌体的生长速度最快.
第三篇ACCA论文范文模板：雷电信号检测方法及相关问题研究
雷电信号检测是雷电探测系统中的一个重要组成部分,本文以提高雷电信号的检测概率为目的,通过对雷电信号的特征分析,提出了两种雷电信号恒虚警率检测算法.为进一步改善检测性能,对现有的恒虚警率(Constant False Alarm Rate: CFAR)检测算法进行研究,并对其进行改进.计算机仿真验证了所提算法的有效性和优异性.归纳起来,本文的主要贡献体现在以下几个方面：
1、利用双通道雷电数据采集与存储系统在两个不同的甚高频(Very High Frequency:VHF)频段进行数据采集.基于短时能量,利用采集数据对雷电波形的时域特征进行统计分析,得到雷电发生过程与雷电脉冲的持续时间和间隔时间的信息.通过对两个频段雷电信号的频域特征进行分析,得到290MHz频段的雷电信号受外界干扰较小的结论.统计分析了采集数据的数字特征,可知方差和峰度都可用于雷电信号检测,并且数据块长度对方差和峰度的统计结果具有影响.
2、针对雷电发生过程的空间、时间和持续时间的随机性与背景环境实时变化的复杂性的现象,受雷达中的自动筛选思想和删除恒虚警率检测算法的启发,提出了基于短时能量的雷电信号恒虚警率检测算法.但短时能量在数据块长度不同时存在噪声淹没信号现象,为克服该缺点,基于短时能量与峰度在对数据块检测时具有互补性的特点,提出了联合检测的雷电信号恒虚警率检测算法.利用已采集的数据,对两者的性能进行验证与比较,可知后者的统计结果明显比前者优越,表明了联合检测的雷电信号恒虚警率检测算法的有效性和优越性.
3、因常规CFAR检测在不同背景环境下不能保持较好的鲁棒性,基于统计量可变标识(Variability Index:VI)和均值比(Mean Rate:MR),将OSCA-CFAR检测和OSSO-CFAR检测代替IVI-CFAR检测中的OS-CFAR检测,提出了改进的可变标识(Modified VI:MVI) CFAR检测.该检测是针对VI-CFAR检测及其改进算法存在的因排序而引起处理时间长且性能非最优的缺点提出的.通过计算机仿真实验,验证了MVI-CFAR检测的有效性.该检测算法的优点是：与现有的检测算法相比,降低了排序处理时间,并且克服了干扰目标随机分布和单个参考滑窗中抗干扰目标最大容限的问题,检测性能也有所提高.通过对统计量Ⅵ进行仿真分析,可知基于Ⅵ类的CFAR检测存在抗干扰目标最大容限的问题.
4、基于统计量排序数据变率(Ordered Data Variability:ODV)的单调性并结合削减平均(Trimmed Mean:TM) CFAR检测,利用分块实现思想,提出自适应削减平均(AdaptiveTM:ATM) CFAR检测.它可克服Ⅵ类CFAR检测和OS类CFAR检测存在抗干扰目标最大容限较低的缺点,可提高基于统计量ODV的自动删除单元平均(Automatic Censored Cell-Averaging:ACCA)的ACCA-ODV检测算法在杂波边缘时虚警概率控制能力,并降低了ACCA-ODV检测的运算复杂度.通过理论分析和计算机仿真,验证了ATM-CFAR检测的有效性和优越性,它具有以下优点：均匀背景下,检测性能与CA-CFAR检测相近；与OS类CFAR和Ⅵ类CFAR检测相比,提高了抗干扰目标的最大容限；在强杂波边缘时,虚警概率控制能力优于ACCA-ODV检测.基于并行分块和两级结构的实现思想,ATM-CFAR检测的硬件资源需求和算法复杂度明显低于ACCA-ODV检测.
5、基于知识帮助并利用复数Wishart分布和复数逆Wishart分布,在杂波为高斯分布的情况下,研究了两种非均匀背景的建模方法及其协方差矩阵的最小均方误差(Minimum Mean Square Error:MMSE)估计.在此基础上,提出了杂波为复合高斯过程的非均匀背景的建模方法,该模型与实际工作环境更接近.在该杂波模型下,基于贝叶斯方法与吉布斯采样,给出了协方差矩阵的MMSE估计及其详细的数学推导,并将MMSE估计结果用于自适应正则化匹配滤波器(Adaptive Normalized Matched Filter:ANMF),得到新的自适应ANMF检测器.在计算机仿真实验中,通过对吉布斯采样收敛性的判别确定了相关参数,分析了自适应ANMF检测器的检测性能,可知它具有CFAR特性.与现有方法相比较,该检测器能够获得最优的检测性能,表明了所提出的建模方法的正确性和优越性.
第四篇ACCA论文范例：*R1B10在结肠癌和肺癌细胞生长中的作用及机制
醛酮还原酶家族1成员B10 (*R1B10,也叫醛糖还原酶相似蛋白1,ARL-1)主要在正常人结肠和小肠表达,而在肝癌和肺癌中过度表达.*R1B10能将有毒的醛酮类物质还原成相应的醇,具有解毒功能.并且*R1B10还能通过与乙酰辅酶A羧化酶α(ACCA)形成蛋白复合物,阻止ACCA降解,从而调节脂质合成.ACCA在许多人类肿瘤中表达上调,它可能通过刺激脂质合成促进癌细胞的生长和增殖.*R1B10在消化道的生物学作用,以及在肿瘤发展、进展中的作用还不清楚.本研究从分子生物学角度,初步探讨了*R1B10对结肠癌细胞(HCT-8)和非小细胞型肺癌细胞(NCI-H460)的作用及相关机制.然后以非小细胞型肺癌细胞(NCI-H460和A549)为重点,通过体内、体外实验相结合,进一步研究了*R1B10对非小细胞型肺癌生长的促进作用及分子机制.这些研究为*R1B10作为肿瘤的防治靶点提供理论依据.
由于*R1B10调节ACCA的活性,在本研究中,我们首先检测了ACCA在结肠癌细胞(HCT-8和HCT-15)和非小细胞型肺癌细胞(NCI-H460)中的表达,以及应用ACCA抑制剂(TOFA)和小干扰RNA (siRNA),观察了ACCA在这些细胞生长存活中的作用.结果表明TOFA有显著的细胞毒性作用,对NCI-H460、HCT-8和HCT-15细胞的半数抑制剂量分别是5.0、5.0和4.5μg/ml.TOFA在1.0-20.0μg/ml时,呈剂量依赖性地有效地抑制了脂肪酸合成,诱导细胞凋亡.通过检测PARP分裂、DNA断裂和annexin-V染色这些凋亡指标评估了细胞死亡.TOFA处理和siRNA转染都同样地诱导了细胞凋亡.补充细胞100μM棕榈酸,脂肪酸合成末端产物,有效地阻止了TOFA和：siRNA诱导的凋亡.
接着,我们研究了*R1B10沉默对细胞生长和存活的作用.结果在HCT-8和NCI-H460细胞中,小干扰RNA介导的*R1B10表达下调导致了caspase-3介导的凋亡.在这些细胞中,总的和亚类细胞脂质,尤其是磷脂减少了50%多,伴随反应性氧化物质(ROS)增加了2到3倍,线粒体细胞色素C流出和caspase-3断裂.*R1B10沉默也增加了α,β-未饱和醛酮物,导致细胞脂质过氧化物增加2到3倍.补充细胞80μM棕榈酸(脂肪酸合成的末端产物)后,部分地阻断了*R1B10沉默诱导的凋亡.而*R1B10抑制剂epalrestat也使细胞内脂质过氧化物升高2倍多,并导致细胞凋亡.这些结果表明*R1B10通过调节脂质代谢和消除细胞醛酮类物质影响细胞存活.
对肺癌的研究被扩展到评估*R1B10作为肺癌防治靶点的潜力,我们使用siRNA使*RIBIO表达下调,评估了非小细胞型肺癌细胞和肿瘤的生长.结果表明在NCI-H460和A549细胞中,*R1B10沉默阻止了细胞生长,并且减少了细胞液体培养基中和半固体培养基中的克隆形成率达40%多.组蛋白H2AX的磷酸化(DNA损伤的一个标志)和彗星实验(alkaline comet assays)结果表明在*R1B10沉默的细胞中,DNA损伤几乎是对照组细胞的3倍.增加的基因毒性应激也导致了p53活化和抗凋亡蛋白bcl-2表达减少,即Bax/bcl-2的比率增加,同时也激活了caspase-3介导的PARP (poly(ADP-ribose) polymerase)断裂和细胞凋亡.更重要的是,在裸鼠肿瘤移植实验中,*R1B10表达下降明显地延迟了皮下肺移植肿瘤的形成和进展.在NCI-H460肺癌动物模型中,当*R1B10的表达被沉默后,肿瘤直到细胞注射后第17天才慢慢出现,而对照组裸鼠的肿瘤在第9天就开始出现；并且对照组裸鼠肿瘤的生长速度将近是*R1B10沉默组的2倍.同时,在A549细胞的肿瘤动物模型中,我们也观察到了相似的结果.
为更深入地研究*R1B10在肺癌形成、进展和防治中的作用,我们应用四环素诱导的基因表达系统技术(BLOCK-iTTM Inducible H1 RNAi Entry Vector Kit, Invitogen)建立了四环素调控*R1B10表达的细胞模型.首先转染调节TetR表达的重组质粒(pcDNA6/TR)到NCI-H460细胞中,用10μg/ml blasticidin筛选得到稳定克隆.再用PCR、RT-PCR技术检测得到高表达TetR的阳性克隆.然后再转染诱导*R1B10siRNA表达的重组质粒(pENTRH1/TO/siRNA)到这些表达TetR的细胞克隆中.用400μg/ml zeocin筛选得到的稳定克隆又经过3μg/ml强力霉素(Doxycycline,四环素类)诱导检测,从而得到*R1B10表达受四环素调节的细胞克隆,扩增冻存这些细胞以后备用.
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这些研究结果表明：*R1B10既通过代谢醛酮类物质而调节它在细胞内的水平,又通过影响脂质合成、线粒体功能和氧化状况,在结肠癌细胞和肺癌细胞生长中起了重要作用.*R1B10也影响了动物肿瘤模型中肺癌的形成和进展.这些结果为靶向*R1B10的肺癌治疗提供重要的实验依据和理论基础.这个研究也建立了一个四环素诱导*R1B10沉默的细胞模型,为肺癌干预和药物研发提供了方便、经济的实验工具.
第五篇ACCA论文范文格式：不同因素诱导鹅肝细胞脂肪变性的机理研究
肝内脂质沉积受到很多因素的影响,高能食物、葡萄糖、胰岛素、胆固醇和肝脏X受体(LXR)激活剂等都可以诱导哺乳动物肝脂肪变性,水禽的肝脂肪变性与哺乳动物有不同的特性,关于水禽肝脂肪变性的机制目前还不清楚.在组织水平,通过对朗德鹅和四川白鹅进行填饲高能碳水化合物检测了填饲对血浆葡萄糖、胰岛素和胆固醇浓度、肝内脂质含量及肝内三酰甘油(TG)含量、与脂肪酸和TG合成、及VLDL-TG(极低密度脂蛋白)组装与分泌相关基因的mRNA表达水平影响在两个品种间的差异；在细胞水平通过添加不同浓度的葡萄糖、胰岛素、胆固醇和LXR激活剂T0901317培养鹅原代肝细胞,检测生酯酶脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)酶活性、细胞内外TG含量及总TG含量、细胞外VLDL浓度、相关基因表达水平；并用western blot和凝胶电泳迁移实验(EMSA)方法检测了葡萄糖和胰岛素、胆固醇和LXR激活剂T0901317处理细胞后转录因子固醇调节元件结合蛋白-1 (SREBP-1)的蛋白变化及SREBP-1的核蛋白与靶基因ACCa的结合情况.主要结果如下：
(1)填饲引起脂质大量沉积在鹅肝脏内,朗德鹅肝内脂质沉积强度要高于四川白鹅；填饲引起的血浆胰岛素和胆固醇水平的增加程度也存在品种差异,朗德鹅的变化大于四川白鹅(P<,0.05)；而填饲后血浆葡萄糖在朗德鹅中上升,在四川白鹅中下降(P<,0.05).填饲后与脂肪酸合成相关的基因ACCa、FAS, SREBP-1和碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)在肝组织中的表达水平降低(P<,0.05)；脂蛋白酯酶(LPL夕和LXRa mRNA表达量显著升高(P<,0.05), VLDL-TG组装与分泌相关基因微粒体甘油三酯转运蛋白(MTTP)基因表达显著降低(P<,0.05)；填饲诱导的基因表达水平的变化在两个品种中显著不同,SREBP-1, ChREBP和MTTP基因表达水平在朗德鹅中的降低程度大于四川白鹅(P＜O.05), LPL基因表达的升高程度在朗德鹅中大于四川白鹅(P<,0.05).
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(2)葡萄糖和胰岛素分别单独与肝细胞培养后显著增加生酯酶FAS和ACC的活性、脂肪酸合成相关基因FAS, ACCa、SREBP-1、ChREBP、LXRa和硬脂酰辅酶A去饱和酶1 (SCD1)的基因表达水平及细胞内TG含量,并且葡萄糖和胰岛素共同培养存在显著协同效应P<,0.05).另外,5 mmol/L葡萄糖和50 nmol/L胰岛素分别单独培养对SREBP-1的核蛋白浓度及SREBP-1核蛋白与靶基因ACCa探针的结合没有显著影响,但当5 mmol/L葡萄糖和50 nmol／L胰岛素共同培养时显著增加了他们的结合P<,0.05).
葡萄糖和胰岛素单独培养鹅原代肝细胞都能显著提高细胞外TG和VLDL的浓度(P<,0.05),同时对VLDL-TG合成与分泌相关基因的表达具有明显诱导作用.葡萄糖和胰岛素共同培养肝细胞,发现对甘油二酯酰基转移酶1(DFAT1)、DGAT2.叉头蛋白1(FoxO1)和MTTP的基因表达有显著协同增加作用(P<,0.05),高胰岛素浓度和葡萄糖的诱导作用高于低胰岛素浓度和葡萄糖的作用(P<,0.05)；葡萄糖和胰岛素共处理细胞对载脂蛋白B(apoB)的基因表达也有显著协同作用(P<,0.05),但低浓度胰岛素和葡萄糖的诱导作用要高于高浓度胰岛素和葡萄糖的作用(P<,0.05)；葡萄糖和胰岛素共处理对细胞外TG和VLDL的浓度的诱导作用也要高于其单独处理作用(P<,0.05).
(3)胆固醇对细胞内TG含量、细胞外TG含量、总TG含量、细胞外胆固醇浓度和VLDL浓度的调控模式与其对脂肪合成相关基因(FAS.ACCa.SREBP.1.ChREBP. LXRa和SCD1)及VLDL-TG组装与分泌相关基因(DGAT2、MTTP和FoxO1)mRNA表达水平的调控模式类似.其中,10μg/mL胆固醇对以上各指标具有促进作用；20μg/mL的胆固醇的诱导作用最明显(P<,0.05)；与20 gg／mL的胆固醇作用相比,30μg/mL的胆固醇表现出了对以上各检测指标的抑制作用(P<,0.05).胆固醇培养细胞能显著增加生酯酶FAS活性、SREBP-1的核蛋白浓度及SREBP-1核蛋白与靶基因ACCα探针的结合；胆固醇对DGAT1和apoB基因表达水平的调控与对其他基因的调控不同,对DGAT1基因表达水平的调控呈现剂量依赖模式,对apoB的mRNA水平没有显著影响(P>,0.05).
(4)LXR激活剂(T0901317)以剂量依赖方式上调细胞内TG含量和总TG含量、上调生酯酶FAS和ACC活性和与脂肪酸合成有关基因(FAS.ACCa.SREBP-1. ChREBP、LXPa和SCD1)的mRNA表达,也同样上调LPL和DGAT1基因表达水平.另外,LXR激活剂(T0901317)可以增加SREBP-1的核蛋白浓度及SREBP-1核蛋白与靶基因ACCa探针的结合；LXR激活剂(T0901317)对细胞外TG和VLDL浓度的调控模式与对MTTP.DGAT2.FOxxO1和apoB基因水平的调控类似,随着T0901317浓度的增加,诱导作用增加,当T0901317浓度达到10μmol／L时,对基因水平的诱导效果降低,要低于1μmol/L T0901317处理组的水平.
结论：填饲、葡萄糖、胰岛素、胆固醇和LXR激活剂(T0901317)都可以通过影响鹅肝细胞内脂肪酸和TG合成、VLDL-TG的组装和分泌诱导肝细胞内的脂质沉积,进而导致肝细胞脂肪变性；在葡萄糖、胰岛素、胆固醇和LXR激活剂(T0901317)诱导的肝脂肪酸合成中,可以通过SREBP-1激活靶基因ACCa的转录实现间接调控作用.
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