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1.盘锦市中心医院神经外科,辽宁盘锦 124010；2.辽河油田第二职工医院,辽宁盘锦 124001；3.辽河油田总医院,辽宁盘锦 124001
[摘 要] 目的 探讨KAI1/CD82在人脑胶质瘤中的表达及其与恶性程度的关系.方法 收集脑胶质瘤病理132例,为胶质瘤组,对照组为20例颅脑外伤内减压的脑组织,按照胶质瘤级别胶质瘤组分为四个亚组.采用免疫组化方法分析胶质瘤组与对照组间,以及不同恶性程度胶质瘤中KAI1/CD82基因表达. 结果KAI1/CD82在胶质瘤组中表达率显著高于对照组（P<,0.05）.不同恶性程度胶质瘤中KAI1/CD82的表达差异有统计学意义（P<,0.05）.KAI1/CD82的表达与人脑胶质瘤的恶性程度呈正相关,在Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤中表达明显高于Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤（P<,0.05）.通过随访发现KAI1/CD82阳性组复发率低于阴性组,两组比较差异有统计学意义（P<,0.05）.结论 KAI1/CD82在胶质瘤的发生和发展中起着重要作用.检测KAI1/CD82的表达可能成为监测胶质瘤进展及临床上判断预后的重要参考指标.
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[关键词] 胶质瘤；KAI1/CD82；免疫组化
[中图分类号] R5[文献标识码] A[文章编号] 1674-074２（２０１5）03（b）－０112-02
[作者简介] 贾军（1972-）,男,辽宁盘锦人,副主任医师,医学硕士,研究方向：神经修复方面.
胶质瘤（glioma）是颅内最常见的原发恶性肿瘤,患者治疗失败和死亡的主要原因是肿瘤的侵袭转移.KAI1/CD82是近年发现的特异性肿瘤转移抑制基因,关于KAI1/CD82抑制肿瘤侵袭转移的作用机制极其复杂,尚未完全阐明.目前国内外,对KAI1/CD82在胶质瘤中的表达及作用研究较少.本实验通过免疫组织化学法对KAI1/CD82在不同恶性程度的胶质瘤组织中的表达进行研究,探讨KAI1/CD82胶质瘤恶性程度与表达水平之间的关系,为进一步治疗和判断预后提供新的参考依据,现报道如下.
1.资料与方法
1.1一般资料
选取辽宁省盘锦市中心医院2011年12月—2012年12月收治、手术切除并经病理组织学确诊的胶质瘤132例,为胶质瘤组.132例患者中,男58例,女74例,年龄22～67岁、平均49岁.按2000年WHO胶质瘤分类标准进行分级： I级28例,Ⅱ级50例,Ⅲ级38例,Ⅳ级16例；24例正常脑组织标本均为急性颅脑损伤患者行内减压术切除的脑组织,为对照组.胶质瘤组与对照组患者在年龄、性别、组织部位等一般资料上上无显著差异,具有可比性.所有标本经10%论文范文溶液固定,石蜡包埋.
1.2主要试剂及免疫组化染色
兔抗人KAI1/CD82单克隆抗体及免疫组化SP试剂盒均购自北京博奥森生物技术有限公司.免疫组化技术采用SP法,标本连续组织切片4～6 μm,常规采用脱蜡,水化,PBS冲洗,3%H2O2室温15 min,PBS冲洗,高压PH9.0抗原修复1 min30 s,加入一抗4℃过夜.PBS冲洗,加入二抗37℃孵育30min,PBS冲洗,DAB显色,苏木素对比染色,水洗分化,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,观察.用已知阳性组织切片做阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照.
1.3结果判断
以在胞浆内出现棕论文范文颗粒判定为阳性.根据染色程度及染色阳性细胞占肿瘤细胞总数百分比综合计分.按照阳性细胞比例计分：≤25%为0分,25%~50%为1分,50%~75%为2分,大于75%为3分；不染色记0分,淡论文范文记1分,论文范文或深论文范文记2分,棕论文范文记3分.每张切片的两项得分之和＜4分为阴性表达,≥4分为阳性表达.
1.4统计方法
所得数据采用SPSS 17.0软件进行统计,χ2检验及Speaman相关分析,P＜0.05为有统计学意义
2.结果
2.1KAI1/CD82蛋白在正常脑组织和脑胶质瘤中的阳性表达
脑胶质瘤组织中KAI1/CD82在脑胶质瘤中阳性率为63.63%（84/132）,高于对照组29.17%（7/24）；差异均有统计学意义（P＜0.05）.
2.2不同病理级别脑胶质瘤标本中KAI1/CD82阳性表达情况
KAI1/CD82蛋白阳性表达率分别为：I级42.86%（12/28）,II级56%（28/50）,Ⅲ级78.95%（30/38）,Ⅳ级87.5%（14/16）,将各相邻级别脑胶质瘤KAI1/CD82蛋白阳性表达率进行χ2检验,差异无统计学意义（P＞0.05）；将低级别组（I+Ⅱ）与高级别组（Ⅲ+Ⅳ）的Kiss-1阳性表达率进行χ2检验,差异有统计学意义（χ2等于6.29,P＜0.05）.
KAI1/CD82在I级+ II级与III级+IV级阳性表达率比较,差异有统计学意义（χ2等于6.29,P＜0.05）.
2.3脑胶质瘤复发率的比较
通过对脑胶质瘤患者术后1年的随访,我们发现脑胶质瘤总复发率为42.42%（56/132）,KAI1/CD82阳性组复发率为33.33%（28/84）,KAI1/CD82阴性组复发率为62.50%（30/48）,KAI1/CD82阳性组的1年复发率低于阴性组,两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,见表2.
3.讨论
KAI1/CD82是位于人染色体11P11.2上高度保守的抑癌基因,最早是由Dong等研究前列腺癌时发现的,它编码含有267个氨基酸的蛋白质CD82,具有10个外显子及9个内含子的,是属于跨膜4超家族成员之一的细胞表面糖蛋白.后来的研究发现KAI1/CD82在乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等多种实体肿瘤中存在不同程度的表达较弱或缺失,它在肿瘤的浸润和转移中起着非常重要的作用.一些研究[1]发现KAI1/CD82在乳腺正常组织高表达,而在乳腺癌中存在表达减弱,并且它与ER阳性呈正相关.肿瘤恶性程度越低,KAI1/CD82表达越高,越不容易发生淋巴结和远处转移[2],患者5年生存率也越高.后来一些研究者[3]发现KAI1/CD82蛋白在肺良性病组的表达高于肺癌组,与临床分期,病理分化程度和淋巴结转移相关,但与性别,年龄,肿瘤大小和病理类型无关.KAI1/CD82的高表达能抑制肺癌区域淋巴结的转移[4], Choi UJ 等[5]证实KAI1/CD82的下降通过PI3K/Akt/mTOR信息传导路径对H1299肺癌细胞转移表型下调Rac1的表达.KAI1/CD82在大肠癌中阳性表达约55％,其表达和Dukes’分期,静脉侵犯,淋巴结转移,肿瘤分化程度和肝转移之间有统计上的显著相关.并且KAI1/CD82表达和Dukes分期被确定为重要和独立的预后因素[6].KAI1/CD82表达的减弱或者缺失可能是肿瘤发生和发展的潜在因素.不少文献报道KAI1/CD82在通过Sprouty2的上调抑制肝癌细胞迁移,野生型p53和JunB的协同作用下,调节着肝癌细胞的KAI1/CD82的蛋白表达[8-9].
KAI1/CD82作为肿瘤转移抑制的细胞表面分子,在脑部恶性疾病中的研究尚不多见有研究发现该基因在神经母细胞瘤中的表达与临床分期呈负相关,其表达下调是神经母细胞瘤分化和转移的一个标志.其表达是由NF-κB和NF-κB介导的APPct等控制[10],可能减缓迁移,促进成熟的少突胶质祖细胞的分化.相反,下调CD82在脑室管膜下区细胞内,利用逆转录病毒载体表达的shRNA,阻止它们分化成髓鞘少突胶质细胞[11].我国研究者发现神经母细胞瘤细胞系的细胞高表达KAI1/CD82,与人神经母细胞瘤细胞系细胞的体外高转移潜能呈负相关[12]；CD82/KAI1在恶性胶质瘤细胞株中表达,且在U251细胞中表达较CHG-5细胞高.CD82/KAI1可抑制胶质瘤U251细胞的迁移[13].
本实验发现,在正常脑组织中KAI1/CD82的阳性表达率为29.17%,显著低于脑胶质瘤组织63.63%.因此,KAI1/CD82的阳性表达有提示存在脑胶质瘤病变的能力.此外,我们进行胶质瘤分级后的分组研究中发现,KAI1/CD82的表达与人脑胶质瘤的恶性程度呈正相关,在Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤中表达明显高于Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤,差异有统计学意义（P<,0.05）.因此,在临床中发现通过随访发现KAI1/CD82的表达较高时可能提示病变分级较高,恶性程度较高.然而,我们通过随访研究结合KAI1/CD82的表达缺失可能是脑胶质瘤复发的重要因素.以上的研究结果表明,KAI1/CD82在中枢神经系统中发挥着重要作用,通过调节少突胶质祖细胞的分化,从而限制脑胶质瘤细胞的迁移,是一种伴随胶质瘤发生发展而发挥功能的保护性因子,这可能正是脑胶质瘤很少发生转移的原因.但其具体的作用途径和机制仍需要我们进一步的研究和探索.
综上,KAI1/CD82在脑胶质瘤的发生和发展过程中起着重要作用,检测KAI1/CD82在脑胶质瘤中的表达可能有助于对病情的评估,从而为脑胶质瘤的治疗和预后奠定基础.
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（收稿日期：2014-10-11）
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