sw英文论文范文参考 sw英文毕业论文范文[精选]有关写作资料

目录

1. 第一篇sw英文论文范文参考：听力水平差异化学生听力三个阶段表现下的对比研究
2. 第二篇sw英文论文样文：《纽约客》的“中国”
3. 第三篇sw英文论文范文模板：TPM4在结直肠癌中的表达及其生物学意义
4. 第四篇sw英文论文范例：融合多肽靶向DNA蛋白激酶自主磷酸化的放射增敏实验研究
5. 第五篇sw英文论文范文格式：整合素ανβ6内吞胞吐循环在调控结肠癌细胞迁移中的作用及分子机制研究

★本文是100篇免费关于sw英文论文范文,均为免费优秀可做为sw英文相关参考文献,是sw英文相关毕业论文写作必备的免费论文范本格式模板,【快快阅读吧！】

第一篇sw英文论文范文参考：听力水平差异化学生听力三个阶段表现下的对比研究

本论文以Anderson（1995）的听力理论为指导框架旨在探究听力水平差异化的学生在听力过程的感知、解析和运用三个核心阶段的表现会有究竟会有什么异同.该论文的实施将在可有效弥补以过程为导向听力研究样式严重不足的同时去丰富外语听力理论的相关建设,更为关键的是对听力水平差异具体产生微观机制的深入发掘将使为不同听者提供个性化听力指导成为可能.

针对听力的感知阶段,由于听者在此需进行语流切分实现对其构成单词的初步识别,对不同听力水平受试间该阶段差异的研究是从可对语流切分施加影响的四个最主要因素视角,并在分别采取了观察他们是怎样从虚拟语流中识别真实单词以及他们如何在音量极轻的状态下进行语流切分两种实验方法来具体展开.研究发现听力优良组和较差组虽然都不认可单独辅音音位在英文中独立成词的这种可能性,即：两者在运用“可能单词限制原则”进行语流切分的能力不存在显著差异,但是两组受试在使用其它三种语流切分机制进行语流切分时还是表现出了能力在不同程度上的差别.具体来说,就使用词汇竞争机制进行语流切分的能力而言,两组受试已开始展现出一定的不同,体现在当所掌握听力词汇中高频词比例相近时,优良组会表现出显著的同较差组相比利用该机制进行语流切分的便利.不仅如此,两者间的差别还更清晰地反映在他们利用非法音位配列来促进语流切分的能力上,听力优良组能够充分利用语流中的非法音位组合来为其切分提供有效支持,而较差组则明显表现出这种能力的缺失.另外,两组受试在利用英语节奏特点进行语流切分的能力上也同样展现出显著差异,表现为优良组受试已建立起视语流重音为独立单词开始的语流切分模式,而较差组对语流中的重读音节则没有表现出丝毫的敏感性.

就解析阶段而言,该阶段的实质是一个围绕动词展开的句法分析和相关命题构建的过程,实验采取了传统的研究动词句法处理时在线执行次要任务的实验设计,研究结果发现听力水平差异化的两组受试并未在动词的处理上表现出明显差异,表明受试在解析阶段的表现不会对其听力水平的差异产生有效影响.

针对运用阶段来说,听者将通过把已获取的命题模型与大脑相关图式建立联系的方式获取对听力材料的最终理解.这个阶段的研究是通过有声思维去具体观察受试听力策略的使用情况来完成的.研究发现优良组与较差组受试在听力经验图式和相关语言及世界知识图式的使用上并没有表现出本质性区别,表现为两组受试对所有听力过程中反馈上的策略都有着涉及使用,以及两者整体策略构成中各种策略比例分布的大体趋同.只是两组受试由具体语言能力所决定的语言图式结构影响了这些受试以往相关听力经验图式的积累,继而在以上两种因素的共同作用下,优良组和较差组也就在听力的运用阶段形成了与之相适应的各自世界知识图式使用的特点,并最终形成了两组受试相互有一定区别的听力运用阶段策略微观层面的使用特征.

该研究结果所显示的听力水平差异化受试彼此不同点在感知阶段的相对聚集显示了在外语的听力理解过程中,尤其是对于水平较差者而言,感知阶段发挥了远比Anderson在母语听力理论中所能为该阶段设想到的更为重要的作用.这种重要性上升同时所带来的尤其是运用阶段重要性的相对下降表明外语听力理解过程中自下而上和自上而下这两种信息处理模式间的互动其实是远不及它们在母语听力理解中来得那样充分与彻底.以上实验发现尤为清晰的指出对于听力水平较差的同学而言,在努力提高听力词汇量的同时,积极适应英语语流声学特点及熟悉英语音系特征是提高听力的优先方向.

第二篇sw英文论文样文：《纽约客》的“中国”

本论文题名《<,纽约客>,的“中国”——以华人英语书写为中心》,旨在跳出华裔文学研究的常规框架,将文学文本放入与一本杂志的“合作”/“合谋”之中,从文本接受的角度,再做界定与考察.笔者试图以资料的客观呈现为第一目标,搭建一个《纽约客》之想象与华人作者自塑文本所共同完成的知识构架.在这条拥有主体性双重“在场”的“书写中国”的线索中,考察华人作者有关中国政治、记忆与*的重述,如何围绕“冷战思维的延续”、“国族叙事”和“‘去根’/‘去中国化’意识”三者的此消彼长而逐渐展开.绪论对选题进行界定整理,并评述相关研究成果,阐述论文研究的思路与构想.

正文部分分为六章.第一章介绍《纽约客》的总体风格与容量,给予数据统计的同时,介绍杂志的主要版块设置与态度立场,并大致梳理杂志中与美国文学相关的重大事件,来说明《纽约客》作为一本中产阶级的“利基”杂志,如何成为美国文学最理想的*平台；还将介绍《纽约客》早期对于中国的部分观察,及其从政治及社会现象的角度出发对中国作家及文学的评论,为后续讨论提供一个较为清晰的背景呈现.

第二章(20世纪30年代至50年代)将讨论林语堂作为中美文化的传播*,在《纽约客》的叙述中所经历的身份转变；分析林语堂在中国创办的《论语》与《宇宙风》在体例与风格上对《纽约客》的复制；讨论为何《纽约客》对于林语堂长篇小说的评论,停留在“中国式文学”及“史料”层面的考察；细述林语堂有“反共”因素的旅行笔记《枕戈待旦》,如何在冷战时期盛行“美国主义”的大语境之下,遭到《纽约客》的全面否定.

第三章(20世纪40年代至60年代)侧重于讨论黎锦扬作为《纽约客》“小说”栏的第一位华人作者,其书写中对于华埠东方奇景再造的“真实性”是否可靠；并考察《纽约客》与他联手利用与滇缅公路有关的文学想象,所构造出的西南中国整体观.

第四章(20世纪40年代至90年代)将梳理《纽约客》通过引介韩素音的三部小说和刊发她的文化报道,来建立她亚洲文化女使节形象的过程；考察《纽约客》如何通过批判她为*与周恩来传记写作中政治立场的转变,来质疑其政治乌托邦的构想.

第五章(20世纪90年代至新世纪前十年)将考察《纽约客》对哈金作品的选取与舍弃背后的文学观念；阐析哈金用“抵达之谜”的核心精神,在书写美华移民时有意违反语言规则,却并未得到《纽约客》认可的背后成因.

第六章(20世纪90年代至今)将讨论由《纽约客》一手捧红的新兴作家李翊云早期作品中的国族叙事,并细察她在向《纽约客》长期关注的作家威廉·,特雷弗学习,在写作中退回“日常生活”的逻辑,有意“去中国化”后,所达到的文本呈现,讨论“书写中国”历史变迁中的文学隐喻.

除结语部分的总结陈述之外,附录将呈现《纽约客》与五位华人作家相关的篇目一览表,以及英语文化界、《纽约客》、和《纽约客》华人作家三者之间的事记比对年表.

第三篇sw英文论文范文模板：TPM4在结直肠癌中的表达及其生物学意义

结直肠癌(Colorectal cancer, CRC)是当代常见消化道恶性肿瘤之一.每年全球有约120万名患者被确诊为结直肠癌,而有超过60万名患者直接或间接死于结直肠癌.在我国,结直肠癌的发病率居常见肿瘤的第四位仅次于肺癌、胃癌及肝癌,也是我国肿瘤发病率上升最快的肿瘤之一.由于结直肠癌发生机制尚不完全明确,故在结肠癌的诊治方面仍存在困难,发病率、死亡率居高不下.目前,手术治疗是结直肠癌最有效的治疗方法,非手术治疗的方法主要有化疗、放疗、生物治疗以及分子靶向治疗.目前提倡个体化治疗,若无法手术治疗,则需行化疗、放疗.结直肠癌的疾病分期是最重要的预后因素.在我国,由于大部分患者被确诊时己属中晚期,术后超过1/3的患者出现复发转移,严重影响患者的生活质量、缩短生存期.因此高效筛查、早期诊断和复发的早期检测是提高结直肠癌的疗效和预后的关键,对提高患者生活质量、减轻痛苦,延长生命具有重要意义.

研究显示,结直肠癌如能早期诊断、早期治疗是有机会治愈的.肿瘤标志物,又称肿瘤标记物(tumor marker,TM),是指特征性存在于恶性肿瘤细胞中,或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质,或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生的物质.肿瘤患者的组织、体液和排泄物中都有肿瘤标志物的存在.检测它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质.并能反映肿瘤发生、发展,了解肿瘤的组织发生、发展、细胞分化程度及细胞的功能,协助肿瘤的诊断、分类分型、判断预后以及指导下一步治疗.肿瘤标志物是目前诊断结直肠癌的主要辅助手段之一.目前普遍使用的结直肠癌血清学诊断标志物是CEA、CA19-9、CA724、 CA125、CA242、CA50,作为目前广泛应用的血清学早期诊断标记物.其灵敏度及特异度都不高.由于肿瘤基因的复杂性,要发现一个灵敏度和特异性的均较高的肿瘤标志物极其困难.医学科研人员正在积极努力寻找即具有高度灵敏度、又具有高度特异性的肿瘤标记物来协助诊断结直肠癌,这是具有重要意义的研究.

在疾病研究中,比较蛋白质组学发挥着重要的作用,它首先检测出一种肿瘤组织的全部蛋白质,并通过对疾病组及对照组的比较,发现疾病特异蛋白组,通过对差异蛋白质组学的分析,可以发现灵敏度较高和特异性较强的肿瘤标志物,有助于恶性肿瘤的早期发现、早期诊断及早期治疗.并对疾病发病机制、诊断、治疗研究和新药开发有重要意义.

本研究通过采用二维色谱与质谱联用技术,对结直肠癌及癌旁组织蛋白进行分析鉴定,结果发现有24个差异蛋白.其中上调蛋白15个,下调蛋白9个.此结果与本实验室前期的试验结果一致.本实验室将对这24个差异蛋白逐一进行验证,此次研究只对原肌球蛋白4(Tropomyosin4, TPM4)蛋白进行验证.

原肌球蛋白(TPM)是细肌丝中与肌动蛋白的结合蛋白,长为41nm,分子量为2×,35KPa,由平行的两条多肽链组成α螺旋构型,每条TPM4都是首尾相连接而形成一条连续不间断的链同肌动蛋白在细肌丝结合.原肌球蛋白是是调节蛋白,它在肌肉收缩过程中起着很重要的作用,以大量异构体形式存在于各种真核细胞中.哺乳动物中的4个TPM基因已被确认,即TPM1、TPM2、TPM3、TPM4,至少可表达出20种TPM异构体.既往研究显示,不同的TPM基因突变分别可引起不同的疾病.目前对原肌球蛋白4(TPM4)的研究较少,主要集中在肿瘤与肌肉相关疾病.肿瘤方面主要局限在与乳腺癌转移的相关性研究及膀胱癌的相关性研究.TPM4在结直肠癌中表达、与结直肠癌发生、发展及转移的相关性研究鲜有报道.我们拟应用二维色谱、质谱联用技术、免疫组织化学,实时定量荧光PCR (Real-Time PCR)和RNAi的方法,来探讨TPM4的表达变化与结直肠癌发病之间的关系.

第一部分：应用二维色谱、质谱联用技术对结直肠癌与癌旁组织进行差异蛋白质组学研究

方法：

1、收集23例TMN分期为Ⅲ期的结直肠癌病理分型为腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本.

2、标本总蛋白提取,蛋白浓度分析.

3、制备标本蛋白水解多肽混合物.

4、二维色谱与质谱联用分析,数据库检索.

5、Western blot蛋白质免疫印迹实验.

结果：

1、通过质谱数据采集、整理,癌组织中获得846个蛋白的鉴定资料,癌旁组织中获得535个蛋白质的鉴定资料.

2、通过差异蛋白质组学研究,发现显著差异蛋白24个,在肿瘤组织中15个蛋白上调表达,9个蛋白下调表达.

3、Western blot结果显示TPM4蛋白在癌组织中表达明显高于癌旁组织.

小结：

1、成功应用二维色谱与质谱联用技术完成结直肠癌组织及癌旁组织蛋白组数据鉴定.

2、通过差异蛋白质组学研究,发现显著差异蛋白24个,其中上调蛋白15个下调蛋白9个.其中TPM4蛋白经Western blot实验显示在癌组织中表达明显高于癌旁组织.

第二部分结直肠癌组织中TPM4水平表达及临床意义

方法：

1、临床资料收集.

2、通过免疫组化方法测定结直肠癌肿瘤组织中TPM4蛋白表达.

结果：

1、结直肠癌肿瘤组织中TPM4表达水平显著高于癌旁组织.

2、结直肠癌TNM分期中,TPM4在Ⅰ期和Ⅱ期癌组织中与Ⅲ期和Ⅳ期表达水平无显著性差异(p>,0.05),

3、TPM4在有淋巴结转移的结直肠癌组织与无淋巴结转移的结直肠癌组织中的表达水平无显著性差异(p>,0.05),

4、TPM4在伴远处转移的结直肠癌组织与无远处转移的结直肠癌组织中的表达水平无显著性差异(p>,0.05),

5、低分化结直肠癌组织中TPM4表达水平显著高于中分化、高分化结直肠癌(p<,0.01).

6、TPM4在结肠癌组织及直肠癌组织中的表达水平无显著性差异(p>,0.05),

7、TPM4在结直肠癌组织中表达与肿瘤大小无显著性关联(p>,0.05).

小结：

1、结直肠癌肿瘤组织中TPM4表达水平显著升高.

2、结直肠癌组织中TPM4蛋白表达水平与肿瘤分化程度有关,与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移及远处转移、肿瘤大小、位置、性别、年龄无关.

第三部分：结直肠癌细胞系的选择、表达载体的构建及鉴定

方法：

1、TPM4蛋白在不同结直肠癌细胞系及正常结肠细胞系中的表达.

2、TPM4siRNA表达载体的构建和质粒扩增.

3、TPM4siRNA载体转染效率测定.

结果：

1、SW480细胞株中TPM4蛋白表达量最高.

2、成功构建的TPM4siRNA表达载体,扩增质粒浓度正常.

3、TPM4siRNA载体的转染效率符合要求.

小结：

1、成功从结直肠癌细胞株中筛选出TPM4高表达的SW480细胞株.

2、本部分实验所需TPM4siRNA载体构建由santa cruz公司完成,成功利用脂质体介导法将重组质粒TPM4siRNA转染到结直肠癌细胞SW480,荧光显微镜观察,构建的TPM siRNA表达载体能够高效转染SW480细胞.

第四部分：TPM4siRNA转染对人结肠癌细胞生物学行为的影响方法：

1、TPM4siRNA对SW480细胞TPM4mRNA转录水平的影响.

2、CCK-8检测TPM4siRNA载体转染后对SW480细胞活性的影响.

3、TPM4siRNA载体转染后,SW480细胞光镜下形态改变及电镜下细胞亚显微结构的改变.

4、TPM4siRNA载体转染后对SW480细胞凋亡的影响.

结果：

1、TPM4siRNA转染后SW480中TPM4mRNA表达量明显下降.

2、在SW480细胞中转染TPM4siRNA载体后,对细胞会生长抑制不明显.从时间梯度图来看,在转染TPM4siRNA载体24h后,开始对细胞生长有明显的抑制作用,48h作用更为明显些.

3、TPM4siRNA转染后SW480细胞的亚细胞结构发生改变.

4、TPM4siRNA转染后SW480细胞凋亡指数明显升高.

小结：

1、TPM4siRNA转染能有效沉默TPM4mRNA的表达.

2、干扰SW480细胞TPM4的表达能有效抑制结直肠癌细胞的增殖.

3、干扰SW480细胞TPM4的表达能改变结直肠癌细胞的亚结构.

4、干扰SW480细胞TPM4的表达可有效促进结直肠癌细胞的凋亡

结论：

1、本课题成功建立了TMN分期为Ⅲ期结直肠癌组织及癌旁组织的差异蛋白质谱,其中差异蛋白24个,上调蛋白15个,下调蛋白9个.TPM4蛋白经蛋白印迹实验证实在癌组织中表达明显高于癌旁组织.

2、通过免疫组化测定组织中TPM4的含量发现结直肠癌肿瘤组织中TPM4水平显著高于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤的分化程度有关.

3、成功构建了沉默TPM4基因的表达载体,并成功、高效转染SW480细胞.

4、TPM4siRNA干扰SW480细胞后其生物学行为发生了明显改变：SW480细胞中TPM4mRNA的表达减少；SW480细胞增殖受到抑制,凋亡增强.

第四篇sw英文论文范例：融合多肽靶向DNA蛋白激酶自主磷酸化的放射增敏实验研究

由辐射引起的DNA损伤的主要类型包括碱基损伤、单链断裂(single strand breaks, SSBs)和双链断裂(DSBs).真核细胞有非常复杂的酶修复系统来消除这些暴露于辐射引起的损伤,碱基损伤和SSBs不被认为是致命的损伤,因为即使它们产生的频率比DNA双链断裂高,它们会完全和迅速地被修复.因为DNA双链断裂修复相当缓慢,并可能在不正确的错误连接时导致染色体畸变,所以DSBs属于电离辐射的致死性效应.碱基损害和SSBs通过碱基切除修复(base excision repair, BER)的途径完成修复.DSBs的修复是由两个不同的修复机制完成：被称为非同源末端连接(NHEJ)和同源重组修复(HRR).NHEJ通路通常被认为是控制辐射对肿瘤细胞诱发致死性损伤得主要途径.虽然NHEJ涉及多个蛋白质的参与,但DNA蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)是一个关键酶.当DNA双链断裂时,DNA-PKcs通过磷酸化被激活,并和它的调节亚基KU70和KU80一起稳定地附着在DNA的断裂末端.这个蛋白质复合物和其他蛋白质,如Mre11、Rad50、Nbs1、XRCC4.和DNA连接酶Ⅳ在一起完成DNA的断裂两端的再连接.共济失调毛细血管扩张症突变(ATM)是另一个重要的修复蛋白,DNA损伤时,参与对细胞周期检测点的调控.

DNA损伤修复机制决定细胞对放射线的内在的放射敏感性.大多数恶性肿瘤对射线不敏感,因而导致照射后复发.如果能够抑制DNA损伤后的修复,则有可能使肿瘤细胞对放射敏感.近年来众多的研究都针对这一方向Non-homologous DNA end joining (NHEJ)是一种主要DNA损伤修复机制NHEJ需要至少六种蛋白Ku70/Ku80异聚体、DNA-PKcs、XRCC4、DNA连接酶Ⅳ和Artemis.DNA-PKcs作为主要的酶影响DNA修复的过程,因而其可以作为一种理想的分子靶.DNA-PKcs在ABCDE (T2609、S2612、T2620、S2624、T2638及T2647), PQR (S2023、S2029、S2041、S2051、S2053、S2056)等区域进行自主磷酸化.研究证明了突变以上位点造成DNAPKcs自我磷酸化障碍可以影响DNAPKcs的活性而增加放射敏感性.本课题研究中,我们设计用大分子化合物融合多肽来干扰DNA-PKcs的磷酸化,从而影响DNAPKcs的活性.融合多肽由两个功能区组成：一部分为肿瘤靶向区即入细胞区(引导肽)HIV 1-TAT部分的氨基酸序列,即TAT蛋白转导域(氨基酸序列为YGRKKRRQRRR),具有很强的穿过细胞膜和核膜的功能.另一部分为分子靶向区,选择DNA-PKcs的ABCDE结构域部分,分3个肽序列FVET (2609) QAS (2612) QGT, QTRT (2620) QEGS (2624) LS, T (2638) *QHDFTLT(2647).分别与HIV 1-TAT融合.

我们设想：融合多肽能够穿过细胞膜和核膜；融合多肽能够增加肿瘤细胞的放射敏感性；其中融合多肽的放射增敏作用机制很可能是：通过抑制相应位点丝(S)、苏(T)氨酸的自主磷酸化(Autophosphorylation)并进一步抑制其下游的Artemis磷酸化而产生作用.1融合多肽的设计、合成及序列和纯度的验证

我们将蛋白转导功能域称为肿瘤细胞靶向区,序列选择HIV 1-TAT的一部分,氨基酸序列为YGRKKRRQRRR,分子量为1560.分子靶向区选择DNA-PKcs的ABCDE结构域部分,分3个肽序列FVET(2609)QAS(2612)QGT QTRT(2620)QEGS(2624)LS, T(2638)*QHDFTLT(2647).分别与HIV1-TAT融合,这样便于分别研究三个多肽的放射增敏作用及相应的作用机制.同时设计随机肽序列(scrambled sequence)作为阴性对照.Biotin标记在多肽的N-端(N-terminusof the peptides)便于观察多肽的入胞情况(多肽具体序列及相对应英文缩写见图1.1).

Biotin-TAT (BT)用于观察细胞穿膜肽TAT自身的穿胞作用,Biotin-wtDIP1 (Bwl)仅为Biotin标记的分子靶向区多肽(FVET (2609) QAS (2612) QGT),未与HIV 1-TAT连接,用于观察在没有细胞穿膜肽TAT引导的情况下分子靶向区多肽是否有穿膜作用.Biotin-TAT-scDIP1 (BTs1)和Biotin-TAT-scDIP2(BTs2)为与细胞穿膜肽TAT连接的两个随机肽.Biotin-TAT-wtDIP1(BTw1)、Biotin-TAT-wtDIP2(BTw2)和Biotin-TAT-wtDIP3(BTw3)分别是HIV 1-TAT与FVET (2609) QAS (2612) QGT、QTRT (2620) QEGS (2624) LS和T (2638) *QHDFTLT (2647)3个分子靶向区多肽融合后的多肽.

多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,固相合成顺序一般从C端向N端合成.为了防止副反应的发生,参加反应的氨基酸的侧链都是被保护的；而羧基是游离的,并且在反应之前必须活化.化学合成方法有两种,即Fmoc和tBoc.

所有合成的多肽得到产品后,经ESI-MS检测所有合成多肽的实际分子量均与各自对应的目标分子量接近,说明该多肽实际分子量与理论值相符,分子量正确(具体见图1.3A-图1.9A),序列正确.HPLC检测分析得各样品纯度均大于95%(具体见图1.3B-图1.9B).2融合多肽入胞、细胞动力学和细胞毒作用的实验研究

我们首先观察和检测融合多肽在多个细胞系中的入胞效果,所用的细胞系包括：人肠癌细胞系RKO、SW480和人宫颈癌细胞系Hela.10μM多肽加入培养的细胞中60分钟后,用免疫荧光显微镜评估肽的定位.应用共聚焦显微镜观察多肽在细胞中的滞留时间.观察融合多肽的半衰期(half-life).用MTT (3-(4, 5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)检测和评价评价多肽的细胞毒作用.用DDP作为一个阳性对照药物.

结果发现：合成的各种多肽(10μM)加入RKO细胞后1小时后,共聚焦显微镜观察多肽的入胞情况：干扰功能域(分子靶向区多肽)未能进入细胞(胞浆或细胞核),而TAT、与TAT融合的随机肽(BTs1和BTs1)以及与TAT融合的分子靶向区多肽(BTw1、BTw2和BTw3)明显地被肿瘤细胞摄取.入胞后,主要分布于胞浆和细胞核.细胞动力学研究结果显示：融合多肽作用4小时后,荧光强度开始明显减弱(图2.2a).各个多肽的细胞毒验证(MTT assay)结果显示：按final concentraton设置的浓度加入多肽(0,5,10,20,40,60,80μM)和及阳性对照药物顺铂(0,5,10,20,40,60,80μM),继续培养48h,多肽对肿瘤细胞均未表现出细胞毒作用(图2.3).而顺铂随着加药浓度的增加对肿瘤细胞的抑制作用明显增加.

基于MTT有关细胞毒试验的结果,我们可以选择10μM、20μM、30μM和40μM等低于80μM浓度的多肽作为下一步一系列试验的工作浓度.3融合多肽对放射敏感性影响的实验研究

这一部分试验在体外(in vitro)应用克隆形成的方法(clony-forming assays)研究融合多肽对肿瘤细胞系(主要为RKO细胞)放射敏感性的影响.通过体外实验测量γ-H2AX焦点形成(y-H2AX focus formation)研究融合多肽对肿瘤细胞DNA损伤形成损伤修复的影响.

我们发现BTw1和BTw2对放射敏感性均无影响,而BTw3能够明显降低放射诱导的细胞生存.D0值代表37%肿瘤细胞存活的致死平均照射剂量.D0值是肿瘤细胞内在放射敏感性(intrinsic cellular radiosensi-tivity)的指标.RKO细胞在BTw3处理后的Do值为1.95Gy,随机肽(BTs2)处理后的Do值为2.46Gy.放射增敏比(SER)为1.25.结果提示BTw3对RKO细胞具有放射增敏作用.

在0小时间点,未检测到γ-H2AX焦点,在照射0.5小时后,各组的γ-H2AX焦点数明显增加,且各组在0.5时间点的γ-H2AX焦点数无明显差异(P>,0.05).在1小时时间点BTw3组的γ-H2AX焦点数明显多于BTs1组(P等于0.032),但与和BTs2组相比无明显差异(P等于0.132).在这一时间点,BTw3组的γ-H2AX焦点数均明显多于BTw1和BTw2组(P分别为0.031和0.009).在2、4、8、24和48小时的时间点,BTw3组的γ-H2AX焦点数明显多于其他各组(单纯照射、BTs1、BTs2、BTw1和BTw2组)(P均小于0.00001).根据结果我们可以推测：融合多肽加放射没有诱导或增加γ-H2AX焦点,但BTw3可能推迟了DNA双链断裂修复的时间,因而延长了γ-H2AX焦点存在的时间.结果提示BTw3对RKO细胞DNA双链断裂修复有抑制作用.

总之,克隆形成试验和γ-H2AX foci试验结果均支持BTw3 (T (2638) *QHDFTLT (2647))对RKO细胞具有潜在的放射增敏作用.4融合多肽(TAT-*QHDFTLT)放射增敏的分子生物学机制研究

基于以上结果,我们进一步研究了BTw3对其对应的苏氨酸位点磷酸化的影响(如对T2647位点磷酸化的影响),以及BTw3对DNA-PKcs下游分子Artemis磷酸化的影响,以及BTw3对介导细胞凋亡Caspase家族关键的执行分子caspase-3的影响.

结果提示：在照射20分钟时,DNA-PKcs T2647磷酸化程度变化不明显,然而在照射60分钟后,我们观察到DNA-PKcs分子T2647磷酸化程度明显降低(见图4.1).

我们研究Artemis蛋白对于电离辐射的效应,具体观察了融合多肽BTw3(TAT-T (2638) *QHDFTLT (2647))联合放射对Artemis S516磷酸化的的影响,用Artemis S516磷酸化特异性抗体来检测和分析Artemis蛋白磷酸化的变化.结果显示：BTw3处理RKO细胞后照射10Gy,在照射后30分钟和60分钟,融合多肽BTw3明显抑制了Artemis S516磷酸化.

细胞凋亡分析caspase-3的变化结果显示：BTw3联合放射与单独放射相比,可以明显增加cleaved caspase-3蛋白表达,说明BTw3可以进一步促进放射诱导的细胞凋亡

结论：

1)MS分析各多肽的相对分子质量测定值与理论值相符.证明序列正确.确保了所合成的肽为高纯度目的肽.

2)HPLC对合成多肽进行的纯度分析显示,所有合成多肽的纯度均在95%以上符合高纯度多肽的合成要求.

3)TAT或融合其他短肽时可穿膜进入细胞,并可定位于细胞质和细胞核,同时具有较高的入胞效率.而非穿膜肽则不能进入细胞.

4)BTwl和BTw2对放射敏感性均无影响,而BTw3能够明显降低RKO细胞放射后的细胞生存.即BTw3对RKO细胞有潜在的放射增敏作用.

5)BTw3明显延长了放射诱导γ-H2AX焦点(γ-H2AX foci)存在的时间

6)克隆形成试验和γ-H2AX foci试验结果均支持BTw3 (T (2638) *QHDFTLT (2647))对RKO细胞具有潜在的放射增敏作用.

7) BTw3 (TAT-T (2638) *QHDFTLT (2647))可以抑制放射诱导的RKO细胞DNA-PKcs分子T2647的磷酸化.

8) BTw3 (TAT-T (2638) *QHDFTLT (2647))对放射诱导的RKO细胞ArtemisS516磷酸化具有抑制作用.

9)BTw3联合放射与单独放射相比,可以明显增加cleaved caspase-3蛋白表达,说明BTw3可以进一步促进放射诱导的细胞凋亡.

第五篇sw英文论文范文格式：整合素ανβ6内吞胞吐循环在调控结肠癌细胞迁移中的作用及分子机制研究

研究背景和意义

结肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,随着我国人民生活水平的提高和饮食结构的改变,结肠癌的发病率有逐年增高的趋势,虽然近年来医疗诊治水平有了很大的提高,但其死亡率仍居高不下,仅次于肺癌和肝癌,占我国恶性肿瘤死亡率第三位,严重危害人民群众健康.

整合素属于黏附分子家族,是一类由α、β亚单位以非共价键结合组成的跨膜糖蛋白受体,介导细胞间及细胞与细胞外基质的黏附作用,通过细胞内外信号传导促进细胞增殖、分化、侵袭和转移.整合素在细胞迁移中的作用主要是通过其与细胞外基质配体不断的连接与解离实现,直接介导细胞的定向迁移过程.整合素αvβ6是一类只表达于恶性上皮性肿瘤组织而在正常及良性肿瘤组织不表达的特殊整合素亚型,在腺上皮来源消化道肿瘤如结直肠癌、胃癌、胰腺癌、胆管癌中高表达；鳞状上皮来源肿瘤如肺癌、口腔鳞状上皮癌亦可见其表达；且主要表达于肿瘤侵袭边缘,与多种肿瘤的恶性行为密切相关.

我们在前期研究发现,整合素αvβ6的表达与结肠癌病理类型、分化程度、TNM分期密切相关,整合素αvβ6阳性表达患者生存期明显缩短,可作为结肠癌独立的不良预后指标；体外细胞实验证实整合素αvβ6的表达可以提高结肠癌细胞增殖、侵袭能力,并在一定程度上提高结肠癌细胞抵御凋亡、对抗化疗药物的能力；我们发现在整合素β6亚单位与ERK2之间存在直接连接,并明确了β6胞内段与ERK2的结合位点(746EAERSK*WQTGTNPLYRG764,下划线处表示两者结合位点),与整合素β6连接的ERK2分子的磷酸化水平更高,提示这种连接可能在一定程度上使ERK2分子发生构象改变,从而更容易被磷酸化,而且能够保护与其β6连接的ERK2分子不容易被细胞质中的磷酸酶去磷酸化而失活；不同细胞密度培养实验证实,随着结肠癌细胞密度增加伴随有PKC活性增强和细胞表面αvβ6的表达增多,

20世纪70年代末和80年代初,人们在研究中发现一些真核细胞的膜蛋白并不是静止地存在于细胞膜上,而是在细胞亚结构中以一种动态流转的形式存在,持续进行一个内吞胞吐的循环过程,如纤连蛋白受体、LDL受体和转铁蛋白受体等,并逐步建立完善了这种内吞胞吐循环的检测方法.作为一种膜蛋白受体,大量实验证实整合素也存在这样持续快速的内吞胞吐循环过程,而且整合素的α链能够决定其是否参与内吞胞吐循环过程以及循环的速率,例如α5β1、α6β4和Mac-1等整合素都参与细胞内吞胞吐循环过程,但α3β1、α4p1和LFA-1等却循环得很慢,或根本不存在内吞胞吐循环.2007年英国的John F.Mashall教授在口腔鳞状细胞癌细胞中检测证实了整合素αvβ1的内吞胞吐循环过程,提示整合素αvβ6在细胞内也是以这种快速循环的形式存在的.

本课题拟在前期整合素αvβ6系统研究的基础上,结合近年来整合素内吞胞吐循环的理论及实验检测方法,研究整合素αvβ6内吞胞吐循环在调控结肠癌细胞恶性生物学行为中的作用,尤其是对细胞迁移能力的影响,探讨整合素αvβ6-ERK2直接连接在整合素avβ6内吞胞吐循环中的连接与解离状态及所发挥的作用等,为进一步深入认识整合素αvβ6在结肠癌细胞中的作用及存在形式,为今后揭示整合素αvβ6内吞胞吐循环调控的分子机制,并进行靶向干预治疗,提供实验依据和理论基础.

第一部分整合素αvβ6在结肠癌细胞中内吞胞吐循环检测方法的建立

目的

摸索建立整合素avβ6在结肠癌细胞中的内吞胞吐循环检测体系.

方法

(1)内吞实验：将结肠癌细胞在4℃下用0.2mg/ml的EZ-Link Sulfo-NHS-SS-Biotin溶液对膜蛋白进行生物素标记；标记后的细胞加入含10%FBS的培养基在37℃下培养；一定时间(5、10、15、30、60min等)后,倒出培养基,将培养瓶迅速转移到冰上,冷PBS冲洗2遍后,加入含有20mMMesNa的Tris缓冲溶液(pH8.6)在4℃下处理15min,去除仍存在于细胞膜上的生物素；加入20mM的碘乙酰胺(iodoacetamide, IAA)处理10min去除过量的MesNa,收集细胞,提取蛋白,检测蛋白浓度,进行整合素αvβ6的capture-ELISA检测.

(2)胞吐实验：开始步骤类似于内吞实验,只是将细胞生物素标记后,在孵箱中培养30min,进行一次MesNa溶液处理,再次放入孵箱中启动胞吐过程,待指定时间(0,5,10,30min等)后,取出细胞置于冰上,第二次用MesNa溶液去除细胞表面胞吐出的αvβ6,通过capture-ELISA实验检测剩余未胞吐αvβ6的含量,从而判断细胞αvβ6胞吐的时相及比例.

(3) Capture-ELISA:首先用5μg/ml10D5、0.05M Na2C03(pH9.6)溶液在4℃下对96孔板进行抗体包被过夜；用含0.05%Tween-20、5%BSA的PBS-T溶液在室温下封闭1h；将50μ1细胞裂解液置入包被完成的96孔板中,在4℃下孵育过夜,进行β6的捕捉；未结合的细胞裂解产物物可以通过PBS-T大量冲洗去除；将96孔板在含有抗生物素蛋白链菌素偶联的辣根过氧化物酶(streptavidin-conjugated horseradish peroxidase)并包含1%BSA的PBS-T作用下,4℃孵育1h；加入邻苯二胺(ortho-phenylenediamine, OPD)显色液室温显色10min,加入终止液终止反应后492nm上机读数.

结果

经过对内吞实验、胞吐实验、capture-ELISA各种实验条件的摸索,初步构建了整合素αvβ6在结肠癌细胞中内吞胞吐循环检测体系,加入阳性对照组与阴性对照组对实验结果的敏感性和特异性进行检测,证实实验结果可靠.随即对结肠癌细胞系HT29和WiDr分别进行了整合素avβ6内吞和胞吐检测,发现在这两种细胞中,整合素avβ6在进行持续内吞胞吐循环,内吞比例在30min达到最大值,并且通过30min时间可有70%左右的整合素avβ6重新胞吐到细胞表面.

结论

在结肠癌HT29和WiDr细胞中,整合素αvβ6持续进行内吞胞吐循环,这是其一般性存在状态,它的一切生物学行为必将建立在这样的运动模式基础上.

意义

该实验检测体系的建立为进一步研究整合素αvβ6内吞胞吐循环在调控结肠癌细胞恶性生物学行为中的作用及分子机制奠定了基础.

第二部分整合素αvβ6-ERK2直接连接对αvβ6内吞胞吐循环的影响

目的

探讨整合素αvβ6-ERK2直接连接对αvβ6内吞胞吐循环的影响.

方法

利用MAPK信号传导通路中ERK2上游MEK的抑制剂PD98059处理细胞抑制ERK2磷酸化,或转染敲除ERK2结合位点的Del. Mutant β6入SW480细胞(αvβ6阴性表达),利用内吞实验、胞吐实验检测在这种状态下αvβ6内吞胞吐循环时相,与自然状态下的αvβ6的循环时相分析比较,确定干预整合素αvp6-ERK2直接连接对avβ6内吞胞吐循环的影响.

结果

实验数据显示抑制ERK磷酸化后可以抑制整合素avβ6的内吞过程,但对其胞吐过程没有影响,同样,敲除β6胞内段的ERK2结合位点能够抑制αvβ6的内吞过程,但对其胞吐过程几乎没有影响.值得注意的是,在内吞起始5min内,敲除β6胞内段的ERK2结合位点能延缓内吞过程,但PD98059对起始5min的内吞过程没有影响.

结论

整合素αvβ6的内吞启动过程在一定程度上受与之直接连接的ERK2磷酸化程度的影响,而且与ERK2连接,尤其是与磷酸化ERK2的连接,可以促进整合素αvβ6的内吞过程的启动.

意义

阐明了整合素αvβ6-ERK2直接连接在整合素αvβ6内吞胞吐过程中的作用和影响,为进一步揭示该过程的分子机制奠定了基础.

第三部分整合素αvβ6内吞胞吐循环在调控结肠癌细胞迁移中的作用

目的

探讨整合素αvβ6内吞胞吐循环在结肠癌细胞迁移过程中的作用.

方法

对整合素αvβ6阳性表达的结肠癌HT29细胞给予三种手段干预,分别是10D5抗体功能性阻断αvβ6、PD98059抑制ERK磷酸化、primaquine抑制胞内空泡运输,通过迁移实验观察细胞在纤连蛋白表面迁移能力的改变；另外,向整合素αvβ6阴性表达的结肠癌SW480细胞分别转染wild-type β6、Del. Mutant (36和空载体,观察这三种细胞迁移能力的差别,同样对三种细胞给予10D5抗体、PD98059和primaquine处理,观察对三种细胞迁移能力影响的不同.

结果

实验结果显示,10D5抗体、PD98059和primaquine均能够抑制HT29细胞在纤连蛋白表面的迁移能力；SW480wild-type p6、SW480Del. Mutant β6、SW480mock三种细胞在纤连蛋白表面的迁移能力明显不同,SW480wild-type β6细胞明显强于另外两种细胞,提示整合素avβ6及αvβ6-ERK2直接连接在结肠癌细胞迁移过程中发挥重要作用；对SW480wild-type β6、SW480Del. Mutant β6、SW480mock三种细胞分别给予10D5抗体、PD98059和primaquine处理,均能够明显抑制SW480wild-type β6细胞在纤连蛋白表面的迁移能力,一方面说明这种迁移能力是由整合素αvβ6介导,另一方面也说明αvp6-ERK2直接连接、αvβ6内吞胞吐循环在其中发挥重要作用.

结论

结肠癌HT29细胞和SW480wild-type β6细胞在纤连蛋白表面的迁移主要是由整合素αvβ6介导,而且在这个过程中整合素αvp6-ERK2直接连接、整合素avβ6内吞胞吐循环均发挥重要作用,在整合素αvβ6、αvβ6-ERK2直接连接、αvβ6内吞胞吐循环三个水平给予干预均可以抑制结肠癌细胞在纤连蛋白表面的迁移能力.

意义

证实了整合素αvβ6在结肠癌细胞迁移过程中的重要作用,并进一步揭示了整合素αvβ6-ERK2直接连接、整合素αvβ6内吞胞吐循环在结肠癌细胞迁移过程中的作用.

第四部分PKC对整合素αvβ6内吞胞吐循环及其作用的影响

目的

探讨PKC对整合素αvβ6内吞胞吐循环及其介导的细胞迁移的影响.

方法

首先,利用PKC激活剂PMA处理细胞,通过内吞实验、胞吐实验检测PKC激活对整合素αvβ6内吞胞吐循环的影响,同时给予PMA和PD98059处理,观察整合素αvβ6内吞胞吐循环的变化；然后,在HT29细胞或SW480wild-type β6、 SW480Del. Mutant β6、SW480mock三种细胞中,给予PMA处理,并结合应用10D5抗体、PD98059和primaquine等,观察对结肠癌细胞在纤连蛋白表面迁移的影响.

结果

实验结果证实,PKC激活能够促进整合素αvβ6的内吞胞吐循环,并且对内吞、胞吐过程都有加速作用；同时应用PMA和PD98059能够在一定程度上抵消PKC激活对整合素αvβ6内吞的影响,但对整合素αvβ6胞吐仍有促进作用；PKC激活能够促进结肠癌HT29细胞在纤连蛋白表面的迁移,同时应用10D5抗体、PD98059和primaquine能在一定程度上抵消这种促进作用；PKC激活能够显著促进SW480wild-type β6细胞在纤连蛋白表面的迁移能力,但对SW480Del.Mutant β6、SW480mock细胞影响不明显.

结论

PKC激活能够加速整合素αvβ6内吞胞吐循环,并能提高αvβ6表达阳性结肠癌细胞在纤连蛋白表面的迁移能力,而且这种促进作用是通过整合素αvβ6依赖的方式实现的.

意义

阐明了PKC在整合素αvβ6内吞胞吐循环及其介导的结肠癌细胞迁移过程中的作用,为进一步研究整合素αvβ6内吞胞吐循环的调控机制打下了基础.

第五部分高/低细胞密度培养对整合素αvβ6亚细胞结构分布的影响

目的

研究在细胞高/低密度培养环境下整合素αvβ6在结肠癌HT29细胞表面分布情况的改变,并通过整合素αvβ6内吞胞吐循环理论对这个现象进行解释.

方法

对于高、低细胞密度培养下的结肠癌HT29细胞,分别通过内吞实验、胞吐实验检测整合素avβ6内吞胞吐循环时相的差异,并利用流式细胞仪检测不同细胞密度培养条件下HT29细胞表面整合素αvβ6数量改变,收集两种状态下的细胞,western blot检测细胞总蛋白中整合素αvβ6的含量,进一步对这个现象进行解释.

结果

实验结果证实,高密度培养条件下HT29细胞表面整合素αvβ6数量较多,并且高细胞密度培养能够加速整合素αvβ6的内吞胞吐循环过程,而在细胞总蛋白中整合素αvβ6的总量并没有显著变化.

结论

结肠癌细胞在高密度培养状态下,细胞膜上整合素αvβ6数量增多是其在细胞亚结构重分布的结果,而整合素αvβ6内吞胞吐循环在这个调节过程中发挥重要作用.细胞短时间内会动员胞浆内大量整合素αvβ6进入内吞胞吐循环,并使内吞胞吐循环速度加快,促进结肠癌细胞迁移.

意义

结肠癌细胞在高密度培养状态下,生存

本文是一篇sw英文论文范文,可作为选题参考.

sw英文引用文献:

[1] 热门sw英文论文选题 sw英文毕业论文题目如何定

[2] sw英文论文摘要怎么写 sw英文论文摘要范文参考

[3] sw英文论文范文参考 sw英文毕业论文范文[精选]