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第一篇临床兽医学论文范文参考：治疗猪链球菌性脑膜炎中药方剂筛选及其作用机理的初步研究
治疗猪链球菌性脑膜炎中药方剂筛选及其作用机理的初步研究
由于猪链球菌（Streptococcus suis, S. suis）的生物学特性致使该病的防控还存在诸多亟待解决的难点,迄今为止猪链球菌病仍然在世界各地引起发病且导致严重后果.抗生素耐药性的不断增强不仅使该病治疗的有效性大打折扣,而且滥用抗生素会造成环境污染和食品安全问题.因此,寻求更加安全有效的防治办法已是当务之急.我国在运用中药防治动物疾病方面具有悠久历史并积累了丰富经验.本试验旨在以中兽医学理论为指导,对猪链球菌性脑膜炎进行辨证分析并筛选出有效防治方药,进一步从细胞和分子水平阐明其作用机制,为临床应用奠定基础.
将购自中国兽医药品监察所的猪链球菌2型（SS2）CVCC606株以形态学观察和聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）技术进行鉴定,更加详细地认识了该菌株的基本特性与致病毒力.试验证明,影响SS2CVCC606株溶血活性值变化的各种条件次序为：接种比例＜増菌时间＜前増菌时间＜培养基pH值；试验显示,SS2CVCC606株溶血素（Suilysin,SLY）产生的最佳培养条件为：培养基pH值为7.3,接种比例为3%,前增菌时间为18h,増菌时间为12h.
为了获得纯度与活性较高的SLY用于试验研究,我们采用硫酸铵沉淀结合分子筛层析的方法对SS2CVCC606株SLY蛋白进行纯化,经SDS-PAGE验证,成功获得了电泳级纯度的溶血素蛋白,经溶血活性及蛋白浓度检测,计算得到其溶血比活为4701.46HU/mg.纯化获得的SLY蛋白回收率达到了2.88%,纯化倍数达到了761.99.
对猪链球菌2型CVCC606株进行扩菌培养后,给21日龄SD大鼠腹腔注射可致其感染发病与死亡,其LD50值为3.4×,109CFU/mL/只.通过腹腔注射0.5LD50猪链球菌2型CVCC606株感染21日龄SD大鼠,成功建立了猪链球菌性脑膜炎大鼠模型.83%的攻菌鼠临床呈现明显的猪链球菌性脑膜炎症状,剖检和病理组织学检查所见符合猪链球菌性脑膜炎的病理变化,从攻菌鼠肝脏、脾脏和脑脊液中能分离到所接种的病原菌.
以中兽医学辨证方法对其进行分析,八纲辨证属热证,卫气营血辨证属营血兼证,脏腑辨证属毒陷心包,扰动肝风.综合证型为“热入营血,毒陷心包,扰动肝风证”.因而确定治疗原则为“清热凉血,平肝熄风”.在这一原则指导下,选择了经典方剂“黄连解毒汤（《外台秘要》）”、“清营汤（《温病条辨》）”、“犀角地黄汤（《备急千金要方》）”和自拟方剂钩藤犀角地黄汤进行方药筛选,结果证明钩藤犀角地黄汤（水牛角100g、生地黄150g、牡丹皮45g、赤芍60g、钩藤60g）疗效最好,将该方剂制成每1mL含1g生药的水煎剂,对猪链球菌性脑膜炎模型大鼠进行灌服,每只鼠每次1mL,每日1次,连用5天,能使其得到有效治疗.
为从细胞和分子水平研究钩藤犀角地黄汤的作用机制,我们建立了脑微血管内皮细胞（Brain Microvascular Endothelial Cells, BMVECs）模型用于研究.采用dispaseII及collagenase/dispase两次消化,结合dextran及percoll两次密度梯度离心的分离纯化方法,成功培养出了RBMVECs,经形态学观察和第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光鉴定,确认该细胞为内皮细胞；MTT法测定RBMVECs的生长曲线,表明其生长高峰跨越第3d～7d.
试验结果显示,钩藤犀角地黄汤在浓度小于80μg/mL,丹皮酚、梓醇及胆固醇小于100μg/mL,芍药苷小于50μg/mL,钩藤碱、异钩藤碱小于10μg/mL时对RBMVECs无细胞毒性.而2μg/mL及其以上的SLY能够引起RBMVECs损伤及细胞间紧密连接异常,且随着SLY浓度升高和对细胞作用时间的延长,损伤作用越严重,彼此呈正相关；最后选择32μg/mL的SLY作用12h建立RBMVECs损伤以及细胞间紧密连接异常的细胞模型.
一定剂量的钩藤犀角地黄汤及其有效成分丹皮酚、梓醇、芍药苷、胆固醇、钩藤碱及异钩藤碱可显著降低SLY引起的RBMVECs毒性和细胞间紧密连接异常程度,对SLY造成的RBMVECs损伤和细胞间通透性增加具有保护作用,对整固BBB屏障具有重要意义.
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试验发现,SLY能够刺激RBMVECs产生IL-6,随着SLY剂量增加和刺激时间延长,IL-6产生越多,彼此呈正相关.钩藤犀角地黄汤及其有效成分均能够降低SLY刺激RBMVECs产生IL-6的水平,提示该方剂及其有效成分可减轻SLY对RBMVECs造成的炎性反应,从而减轻RBMVECs的损伤,降低BBB的通透性,对猪链球菌性脑膜炎具有治疗作用.试验证明,钩藤犀角地黄汤及其有效成分均能够纠正SLY刺激RBMVECs所引起的NO和ET-1分泌失衡,促使NO/ET-1处于高位平衡状态,从而减轻或消除血管舒缩紊乱,提高BMVECs的抗损伤能力,减轻或消除低于该阈值下致病因子所带来的影响,最终达到保护BMVECs,维持细胞微环境稳态的目的.
第二篇临床兽医学论文样文：基于奶牛胎衣不下基本病机—治则—疗效评价体系的中药复方制剂研究
胎衣不下是奶牛临床上常见产科疾病之一,常继发奶牛产后子宫疾病,降低产奶量,降低产后繁殖性能.由于其病因的不确定性和复杂性,目前尚缺乏有效治疗方案.传统兽医学在防治家畜胎衣不下方面累积了丰富的证治经验,但由于传统兽医学辨证论治个体化诊疗特点,目前尚缺乏基于群体防治的有效中药制剂.本研究以奶牛胎衣不下为研究对象,基于传统兽医理论,根据目前规模化牛场该病发病特点和用药需求,构建奶牛胎衣不下的基本病机–治则–疗效评价体系,开展中兽医药防治奶牛胎衣不下的研究,旨在研制有效防治奶牛胎衣不下的中药复方制剂.
运用传统兽医学辨证分型和基于临床病例分析,建立防治奶牛胎衣不下药物疗效评价标准,构建了奶牛胎衣不下基本病机(血瘀证)–治则(活血化瘀)–疗效评价体系,以临床疗效为导向,进行有效方筛选,确立了防治奶牛胎衣不下中药制剂——“宫衣净酊”.
采用L49（3）正交设计方法,优选了“宫衣净酊”渗漉提取制备工艺,即加入10倍量70%乙醇,浸渍24h,以2mL/(min·,kg)进行渗漉提取；开展薄层色谱鉴定试验研究,确定了急性子、红花、葛根及川牛膝4味主药的TLC检测条件；建立了以羟基红花*素A（HSYA）和葛根素为主要成分的HPLC定量检测方法；确定了制剂质量控制参数,分别为相对密度不低于0.90mg/mL；“宫衣净酊”中,HSYA含量不低于0.350mg/mL,葛根素含量不低于1.35mg/mL；pH范围在4.5~6.5；乙醇含量不高于40浓度%（v/v）.
采用急性毒性和亚慢性毒性试验方法,开展“宫衣净酊”临床前安全性评价,改良寇氏法测得“宫衣净酊”对小鼠的经口LD50为28.84g/kg·,bw,以7.00g/kg·,bw（相当于1/10~1/4LD50剂量）作为最高给药剂量,连续给药30天,“宫衣净酊”对受试大鼠体重及脏器系数、血液常规、生化指标及主要脏器无不良影响；综合分析,“宫衣净酊”属实际无毒性产品.
开展了“宫衣净酊”防治奶牛胎衣不下的临床疗效评价研究,结果表明,“宫衣净酊”可有效促进滞留胎衣自主排出,有效率为76.4%；与子宫灌注土霉素疗法比较,给予“宫衣净酊”治疗后,受试母牛产后首次配种时间显著提前（74.8±,23.7vs.94.6±,33.3days, P <,0.01）,空怀时间显著缩短（94.8±,41.3vs.141.7±,53.3days, P <,0.01）,首次配种怀孕率（56.9%vs.40.7%, P等于0.06）和产后180天内的怀孕率（84.9%vs.72.7%, P等于0.054）均有升高趋势.与健康产犊母牛比较,产后2~4h内灌服“宫衣净酊”,受试母牛产后胎衣不下发病率（3.3%vs.17.0%, P <,0.01）和产褥期子宫炎发病率（6.1%vs.20.9%, P <,0.01）显著降低,产后首次配种时间显著提前（71.8±,18.4vs.86.4±,33.5days, P <,0.01）,空怀时间显著缩短（89.8±,32.3vs.113.6±,42.9days, P <,0.01）,并且产后180天内的怀孕率有升高趋势（87.3%vs.80.7%, P等于0.096）.表明“宫衣净酊”是防治奶牛胎衣不下的有效中药制剂.
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以奶牛胎衣不下自然病例为研究对象,从自由基代谢抗氧化酶活性、炎性细胞因子水平和肝功能酶活性角度,探讨“宫衣净酊”治疗奶牛胎衣不下的作用机理,研究表明,”宫衣净酊”可有效调节胎衣不下患牛血清中GSH-Px、SOD、MPO、IL–2、TNF–α及IFN–γ水平,而对ALT和AST水平的影响不显著,表明“宫衣净酊”防治奶牛胎衣不下可能与其调节机体自由基代谢抗氧化酶活性和炎性细胞因子水平有关；并且按照推荐给药剂量和治疗程序,该制剂不会对奶牛肝脏功能造成不良影响.
采用大鼠血瘀模型和小鼠疼痛模型,开展“宫衣净酊”药理作用研究,结果表明,“宫衣净酊”可有效提高Dextran-500诱导的血瘀大鼠血浆中NO和6-keto-PGF1α水平,降低ET-1和TXB2水平,调节ET-1/NO和TXB2/6-keto-PGF1α比例平衡；抑制醋酸诱导的小鼠疼痛反应,延迟小鼠对热刺激的痛觉反应时间,并具有明显量-效和时-效关系；提示“宫衣净酊”具有改善机体血瘀状态和缓解疼痛的作用.
第三篇临床兽医学论文范文模板：中国兽医图书出版战略研究
兽医图书出版对我国人民健康和畜牧业发展以至整个农业的发展有着极其重要的作用,兽医图书出版属专业出版范畴,在我国有近2000年历史,新中国成立后是发展最快的时期,尤其是改革开放后的30年,兽医图书出版在经历了萎缩、断层、分散、国际化受阻、品种匮乏、内容质量不高等艰难时期后,迎来了快速发展的大好局面.但是,随着改革开放的深入,特别是市场化、信息化、全球化的大潮来袭,兽医图书出版与兽医科学技术的发展以及广大读者对新知识、新技术的迫切渴望形成了巨大的差距.这就为我国从战略层面上规划统筹兽医图书出版提出了新的要求.要求我们从战略层面对兽医图书结构布局、资源配置、发展目标、战略措施、发展方向等进行深入研究,以期对兽医图书出版起到指导和借鉴作用.
本文立足于对新中国成立以来60余年兽医图书出版状况的宏观统计和图书品种、内容的深入分析,以专业图书常用分类方法按照学术专著(含译著)、高等教育教材、培训教材、科普读物和出版物学科分类,采用系统分析法、案例分析法、统计分析法等,站在政治、经济、社会、文化、科技、出版等各个角度对兽医图书出版问题分别进行了分析研究,从兽医图书出版战略的高度得出了七个结论.主要包括：1.中国兽医图书出版战略目标是构建以信息、网络技术为支撑,以市场需求为导向,符合生态环境保护、品种结构合理、可持续发展的兽医图书出版体系.2.中国兽医图书出版必须坚持服务于兽医学科发展与教育、服务于畜牧业生产与安全、服务于大众健康与生活“三个服务”的出版方向,这是坚持为实现新的“四个现代化”、实现中华民族伟大复兴中国梦服务的政治方向的具体体现.3.必须进一步提高中国兽医图书出版的适应性战略措施.即适应市场多样化需求,普遍提高各类兽医图书科技含金量,根据自身优势、突出重点出版物,遵循市场规律,避免盲目竞争.4.必须进一步建立中国兽医图书出版的品牌战略措施.借助国家精品课程建设项目、国家重大出版基金项目,树立品牌权威、立传世之作.5.必须进一步加强中国兽医图书出版的数字化战略措施.加大投入,创造条件加快建立以计算机技术、多媒体技术和网络技术为支撑的数字化出版体系.6.必须进一步建立中国兽医图书出版的环保战略措施.把出版发展纳入国家的生态建设任务之中,使出版走上“绿色”发展之路.7.必须进一步提高中国兽医图书出版的国际交流战略措施.扩大“引进来、走出去”的国际交流,保护知识产权,繁荣“版权”贸易.
本研究还就落实出版战略的具体措施方面提出了四条建议：1.通过我国兽医图书的组织与运行,推进建立适合我国国情的兽医科学技术推广与应用体系.2.深度挖掘和整理传统中兽医学方面古籍,在国家或行业的引导和支持下尽快推进传统中医学著作“走出去”战略的落实.3.进一步强化国家对兽医图书出版的指导和规划功能,建立以立项方式为引导的兽医图书重大出版项目体系,强化行业部门和出版企业在出版资源配置和兽医图书出版结构与布局的交流与沟通,为实现“绿色”出版、高效出版奠定坚实基础.4.在新媒体时代,出版企业联合开发兽医学科技术在线服务平台以及应用技术推广体系.
第四篇临床兽医学论文范例：中药新促孕液防治母畜子宫内膜炎的机理研究
子宫内膜炎是母畜常见的一种生殖系统疾病,严重影响着畜牧业的发展.西兽医常用抗生素和激素治疗,这些疗法虽有不同程度的效果,但西药的毒副作用和对食品安全的影响已引起人们的广泛关注,而用中药防治该病则可避免上述弊端.本课题组依据中兽医学理论研制成功中药新促孕液(NFPL),用于防治母畜子宫内膜炎取得了可靠疗效.为进一步改进组方、提高疗效,本研究系统观察了NFPL及其组分药、相关单味药和其加味方对子宫内膜炎主要病原菌生长、母畜血液流变、子宫内膜结构和子宫运动性等方面的影响,从清热燥湿、活血化瘀和祛腐排脓等方面探讨了NFPL的作用机理.
试验Ⅰ 奶牛子宫内膜炎主要病原菌的分离及鉴定 从南京地区奶牛场采集临床型子宫内膜炎患牛子宫分泌物进行病原菌分离及鉴定,为研究NFPL的抑菌机理和制备疾病模型准备材料.结果,共分离出葡萄球菌10株、链球菌6株、大肠杆菌8株,溶血性和非溶血性大肠杆菌的血清型分别为O159和O110,O159的致病性较强,可在68h内引起小鼠全部死亡.表明葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌是引起奶牛子宫内膜炎的主要病原菌. 试验Ⅱ NFPL及其组分药和相关单昧药的抑菌作用测定 为了研究NFPL的清热燥湿作用和改进组方,测定了NFPL及其组分药和其他10味中药对子宫内膜炎病原菌主要分离菌株的体外抑菌圈直径和最小抑菌浓度.结果表明,NFPL对6个分离菌株均具有较强的抑制作用；NFPL的组分药以淫羊藿、黄柏和硼砂的抑菌作用较强,其他单味药以丹参的作用最强,可以作为NFPL改进方的组分药. 试验Ⅲ NFPL及其主药和相关单味药影响血液流变的作用测定 为了观察NFPL的活血化瘀作用和改进组方,选用25只健康家兔随机分为5组,4个试验组分别用NFPL、红花、丹参和川芎煎剂灌胃,对照组灌给等量生理盐水,每天1次,连续7d,末次给药后耳缘静脉注射高分子葡聚糖致瘀；分别于首次给药前、用药后和致瘀后1h采血,用MVIS-2035型全自动血液流变分析系统测定血液流变学参数的变化.结果表明,NFPL能显著降低健康家兔的血液粘度,并能显著抵抗高分子葡聚糖的致瘀作用,其第五篇临床兽医学论文范文格式：芪黄汤及其提取成分抗大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体作用及其机理研究
猪水肿病(Edema disease of pig,EDP)又称肠毒血症,是由几种特定血清型的致病性大肠杆菌(O138,O139和O141)引发的,而志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-IIv)是引发EDP的主要毒力因子之一.大肠杆菌菌株大多在消化道和小肠附着繁殖,产生的毒素以特异性机制进入血液循环,引起肠道、皮肤和大脑血管内皮细胞的病变和坏死,进一步引起血管通透性增强,从而导致受影响的器官出现水肿,最终导致动物死亡.这种疾病蔓延迅速,致死率高,给养猪业造成极大的伤害和损失.当前多利用母源抗体预防该病,但效果并不尽如人意.虽然抗生素或抗血清可以用于该病的防治,但是存在耐药性、药物残留和成本高等问题.中兽医学临床实践和现代中药药理学研究表明,许多中药能有效抑制和消除细菌病原体、清除细菌毒素,具有疗效高、毒性低、副作用小、耐药性低及药物残留水平低的优点,并被广泛用于预防和治疗传染病,所以,研究利用中药防治细菌性疾病已成为当今兽医界的热点.前期试验证实,芪黄汤具有很好的治疗SLT-IIv引发的水肿病的作用,本试验即在此基础上进行深入研究.
本研究采用Affymetrix小鼠全基因组表达谱芯片和差异荧光凝胶电泳(DIGE)对芪黄汤抗志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-IIv)机理进行研究.以小鼠肠微血管内皮细胞(MIMVECs)为研究对象,先后加入SLT-IIv和芪黄汤作用12 h后,提取四个处理组的总RNA和总蛋白.基因芯片及差异荧光凝胶电泳技术检测各组基因、蛋白的变化情况并进行生物学分析.SLT-Ⅱv组与对照组比较共有63个差异表达基因,其中上调基因49个,下调基因14个,73个差异表达蛋白,其中表达下调共25个蛋白,48个蛋白表达上调,芪黄汤与对照组相比较有128个差异表达基因,其中上调基因44个,下调基因84个,26个差异表达蛋白,19个表达上调蛋白,7个蛋白表达下调,SLT-Ⅱv-芪黄汤与对照组比较有108个差异表达基因,其中上调基因72个,下调基因36个,126个差异表达蛋白,上调下调表达各63个蛋白,SLT-Ⅱv-芪黄汤与SLT-Ⅱv组比较有111个差异表达基因,其中上调基因74个,下调基因37个,224个差异表达蛋白,其中139个蛋白表达上调,85个蛋白表达下调.综合各组差异基因、蛋白发现,芪黄汤通过抑制抗凋亡基因的转录,促进受损细胞凋亡,加速机体蛋白的合成,增强细胞能量的代谢,减少不正常肌动蛋白的表达,回复正常细胞骨架排布等方面来改善SLT-Ⅱv所产生的细胞损伤、血管收缩和细胞通透性变化等各项毒理效应.
为进一步研究芪黄汤的作用机理,本研究采用高效液相色谱法分离提纯芪黄汤的水溶性成分.以乙腈和0.5%乙酸水溶液为流动相按一定梯度洗脱条件分离提纯芪黄汤,获得15个可溶于水的提取成分,且通过分析型高效液相色谱和液质连用仪初步鉴定出:7峰为没食子酸,13峰为槲皮素,并进一步研究各成分对MIMVECs的作用.
首先,为测定芪黄汤及其提取成分对经SLT-IIv诱导损伤的MIMVECs的影响,以MIMVECs感染SLT-IIv为细胞模型,芪黄汤及其提取成分分别作用12 h后收集细胞上清液,测定各项指标.结果显示,芪黄汤、醇沉上清组、醇沉沉淀组和2、4、6、11、12、14、15号提取峰部分浓度作用于受损细胞,能极显著(P<,0.01)降低LDH的活力,而3、7、8、10和13号提取峰与毒素对照组无显著性差异,除醇沉沉淀组外,各组药物和成分在一定浓度范围内作用于受损细胞后,能极显著(P<,0.01)提高受损细胞的SOD活力,芪黄汤组、醇沉上清组、醇沉沉淀和2、3、4、7、8、11、12、14、15号提取峰在部分浓度条件下,能极显著(P<,0.01)降低MDA含量,而9、10号提取峰MDA含量与毒素对照组无显著性差异,除5号提取峰外,其余各组药物和成分在一定浓度作用下,GSH-Px活力极显著(P<,0.01)高于毒素对照组.以上结果说明,芪黄汤及其成分均可明显提高MIMVECs的SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,从而清除体内大量的对组织、细胞具有严重损害作用的自由基.经3、7、8、11号提取峰作用后,能极显著(P<,0.01)降低受损细胞分泌NO的量,各药物成分组与毒素对照组比较,均能显著(P<,0.05)或极显著(P<,0.01)降低毒素作用后细胞的ET-1含量,而各组间ET-1含量差别不显著.表明,芪黄汤可在由NO和ET-1介导的机体腹泻、水肿等疾病中发挥治疗作用.
其次,从测定BSA通过Transwell小室的OD值变化来探讨芪黄汤及其提取成分对SLT-IIv损伤的MIMVECs通透性的影响,结果表明各种提取成分均能不同程度降低SLT-IIv导致的MIMVECs通透性升高.
最后,应用激光多普勒血流仪来测量芪黄汤及其提取成分导入前后对三阴交穴位区微血管振幅的影响,结果显示,除醇沉沉淀物和5、8、12、14号提取峰作用后微血管振幅变化不显著外,其余芪黄汤部分和提取成分均可不同程度提高微血管振幅,表明芪黄汤和部分提取成分能够改善机体血液微循环.
综上所述,芪黄汤及其提取成分能够有效抗SLT-IIv作用,其机理主要是通过改善MIMVECs损伤、降低微血管通透性和改善微循环,达到治疗猪水肿病的目的.
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