简介:大学硕士与本科基因耐药毕业论文开题报告范文和相关优秀学术职称论文参考文献资料下载，关于免费教你怎么写基因耐药方面论文范文。
1.浙江省台州市三门县人民医院检验科,浙江三门 317100；2.浙江省人民医院检验科,浙江杭州 310014
[摘 要] 目的 了解耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌耐药基因的携带情况.方法 收集69株浙江省人民医院住院病人耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌株,改良Hodge试验进行KPC型碳青霉烯酶初筛检测,PCR法进行HSV、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、GES、VEB、IMP、VIM、论文范文E、KPC、IMI /NMC、NDM基因检测,并对部分阳性基因进行测序.结果 69株肺炎克雷伯菌改良Hodge试验阳性48株,阳性率63.8%.PCR检测结果为56株（81.2%）携带KPC基因,60株（87%）携带HSV,20株（29.0%）携带OXA-3基因；3株（4.35%）肺炎克雷伯菌携带OXA-1基因.对KPC基因测序结果为KPC-2亚型.结论 本次检测的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌携带KPC-2基因为主,应加强院感监测和预防.
[关键词] 肺炎克雷伯菌；碳青霉烯酶；K PC；Hodge试验
[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2013）04（a）-0028-03
肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae,KPN）是重要的医院感染病原菌,由于产超广谱β内酰胺酶（ESBL）而被广泛关注.碳青霉烯类抗生素为一组新型β-内酰胺类抗生素,是目前治疗产ESBL的肺炎克雷伯菌等肠杆菌科细菌感染最有效的抗生素,构筑了抗β-内酰胺酶的最后一道屏障.近年来肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素产生了耐药性,并且出现播散的情况,给临床治疗和院感控制带来了极大的挑战[1].肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制主要是产碳青霉烯水解酶[2],为了了解本院肺炎克雷伯菌的产酶情况,对69株分离自临床病人的KPN菌进行了4种β内酰胺酶基因(HSV、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群)、8种碳青霉烯酶基因（GES、VEB、IMP、VIM、论文范文E、KPC、IMI/NMC、NDM）检测.
1.材料与方法
1.1 材料与试剂
1.1.1 菌株来源 69株肺炎克雷伯菌为2010年浙江省人民医院住院患者初次分离对碳青霉烯类抗生素产生了*或耐药的菌株.1.1.2 仪器及试剂 菌种及药敏鉴定使用VITEK32全自动细菌鉴定药敏系统（法国生物梅里埃公司）及配套的试剂；PE-9700 PCR仪（美国ABI公司）；Eppendorf 5417R高速离心机（德国艾本得）；Bio-Rad GelDoc凝胶电泳成像分析系统（美国伯乐公司）.12种基因的引物由生工生物工程（上海）有限公司合成, PCR通用试剂盒Premix Taq及DNA分子量标准DL2,000 DNA Marker均为宝生物工程（大连）有限公司产品.
1.2 方法
1.2.1 抗菌药物敏感性试验 使用E-test方法对亚胺培南和美罗培南药敏结果进行确认.
1.2.2 改良Ho dge试验检测碳青霉烯酶 0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌ATCC 25922菌液稀释10倍后均匀涂布MH平板,中间贴厄他培南（10 μg）纸片,接种碳青霉烯类抗生素*或耐药的菌株,无菌接种环自纸片外缘向平板边缘划线,35℃孵育16～18 h后观察结果.结果判断：厄他培南抑菌圈内出现待检菌矢状生长者为产碳青霉烯酶菌.质控菌为大肠杆菌ATCC25922.
耐药基因检测:屎肠球菌携带耐药基因为首次发现
1.2.3 基因检测方法 煮沸法提取细菌DNA,PCR引物序列表见表1,扩增条件均为：94℃预变性4 min,然后94℃40s→55℃40s→72℃60s,35个循环,最后72℃延伸5 min.扩增产物送上海生工测序,测序结果运用BLAST在线软件进行比对分析.
2.结果
2.1 抗生素耐药率
对69株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌进行常用的抗生素的耐药检测,结果为氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛酯和注射用头孢呋辛钠耐药率为100%,耐药率低于50%的只有阿米卡星抗生素,其余的耐药率都大于50%,结果如下表2.
2.2 基因检测结果
对6 9 株肺炎克雷伯菌依次进行上述12 种基因进行扩增并检测,结果显示56 株肺炎克雷伯菌K PC酶基因阳性,阳性率为81.2%；60株HSV基因阳性,阳性率为87.0%；20株OXA-3基因阳性,阳性率为29.0%,3株肺炎克雷伯菌OXA-1酶基因阳性,阳性率为4.35%；其他基因均阴性.部分KPC基因扩增电泳结果如图1所示.
2.3 Hod ge试验和K PC结果
Hod ge试验阳性55株,阳性率为79.7%,PCR法检测到KPC基因56株,阳性率为81.2%,有48株Hodge阳性及检测到KPC基因,有4株Hodge试验阳性但未检测到KPC,有6株检测到KPC但Hodge试验阴性.有8株Hodge试验阴性同时未检测到KPC.具体结果见表2.
3.讨论
随着碳青霉烯类抗生素这类药物在临床上的广泛应用,耐碳青霉烯类抗生素菌株逐渐增多并出现播散的现象,给临床的治疗带来了极大的困难.我们69株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌耐性率分析可见对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛耐药率为100%,三代头孢耐药率超过90%,其他头孢菌素及复合制剂的耐药率均超过50%,只有阿米卡星低于50%.可见耐碳青霉烯肺炎克雷伯的耐药率极高,不仅对β内酰胺类抗生素耐药,而且对其他种类的抗生素耐药率也较高,表明菌株可能同时存在多种耐药基因.利用PCR技术对12种β内酰胺酶基因进行检测,结果显示KPC基因阳性率为81.2%（56株）,HSV基因阳性率为87.0%（60株）大多数菌株对检测的耐药基因存在2种以上,还有少数菌株存在3种及以上的耐药基因.
KPC基因为A类碳青霉烯酶,能水解碳青霉烯类抗生素及头孢菌素,最早由美国Hig it Y等于20 01年在肺炎克雷伯菌株中发现,并命令为肺炎克雷伯碳青霉烯酶（KPC-1）,后发现与KPC-2为同一菌株.之后几年携带KPC的肠杆菌在美国逐渐流行,并向全球扩散[3- 6].对KPC基因研究发现单独存在时对碳青霉烯类抗生素耐药水平较低,同时与其他耐药机制存在时耐药水平会大幅上升[3,7].测序结果表明本院的KPC基因为KPC-2亚型,这与国内和浙江报道的KPC-2为国内主要的流行菌株相符[8].KPC-2基因报道均位于质粒上,利用T3类转座子结构在菌株水平中传播,造成近年来在临床菌株中快速播散[9-10].
2009年CLSI提出用改良Hodge试验作为检测碳青酶烯酶的筛选试验,初筛试验与基因检测两者之间有较高的符合率.本研究中有4株Hodge试验阳性但未检测到KPC基因,可能与 Hodge试验用于检测碳青霉烯酶包括KPC,IMP等,不存在检测特异性有关.有6株检测到KPC但Hodge试验阴性可能由于KPC表达水平偏低.
可见,由携带KPC基因的肺炎克雷伯菌株所致的医院感染,由于耐药水平极高,并可在医院内传播扩散,对临床患者的治疗造成了极大的困难,因此医院必须加强监测和控制,及时修订医院感染预防控制策略,以减缓耐药菌株的产生和传播.
[参考文献]
[1] Jean SS,Hsueh PR. High burden of antimicrobial resistance inAsia[J]. Int J Antimicrob Agents,2011,37（4）：291-295.
[2] N e i l G u p t a ,B r a n d i M. L i m b a g o,J e a n B . P a t e l,e t a l .Ca r b a p e n em-Re s i s t a n t En t e r o b a c t e r i a c e a e：Epid emiolog ya nd Pr event ion. Healt hca r e Epidemiolog y[J ]. HEALTHCAREEPIDEMIOLOGY,2011,53（1）：60-67.
[3] Yig i t,H.,A. M. Qu e e n a n,G. J . An d e r s o n,e t a l . 2 0 01. Nove lc a r b a p e n em- h y d r o l y z i n g β- l a c t a ma s e,K P C -1,f r om ac a r b a p e n em- r e s i s t a n t s t r a i n o f K l e b s i e l l a p n e umo n i a e .Antimicrob[J].Agents Chemother,45：115-1161.
[4] Lomaest ro,B.M.,E. H. Tobin,W. Shang,et al. Goot z. 2006. Thespread of Klebsiella pneumoniae carbapenemase-producing K.pneumoniae to upstate New York. Clin[J]. Infect,Dis.43:e26 –e28.
[5] G o r e n MG,N a v o n -Ve n e z i a S,C h m e l n i t s k y I ,e t a l .Ca rbapenem-resist ant KPC-2-producing Escher ichia coli in aTel Aviv Medical Center,2005 to 2008[J]. Antimicrob AgentsChemother,2010,54（6）：2687-2691.
[6] Liu,Y. F.,J. J. Yan,et al. Character-ization of carbapenem-nonsusceptibleEscherichia coli isolates f rom a uni-versity hospitalin Taiwan. J. Antimicrob[J]. Chemother,61：1020 –1023.
[7] Wol t e r DJ,Ku r piel PM,Wood ford N,e t a l. Phe not y pic a nde n z yma t ic compa r a t ive a n a lysi s of t he novel KPC va r i a ntKPC-5 a nd it s evolut iona r y va r ia nt s, KPC-2 a nd KPC- 4[J ].Antimicrob Agents Chemother,2009,53（2）：557-562.
[8] We i ZQ,Du XX,Yu YS,e t a l .Pl a 论文范文id -me d i a t e d KPC-2 i na Klebsiel la pneumon ia e isolat e f rom Chi na[J ].Ant imic robAgents Chemother,2007,51（2）：763-765.
[9] Cu zon G,Na a s T,Nordma n n P.Fu nc t ion a l cha r a c t e r i z a t ionof Tn4401,a Tn3-based t r ansposon involved in blaKPC genemobilizat ion[J ].Ant imicrob Agents Chemother,2011,55（11）：5370-5373.
[10] Naas T,Cuzon G,Villegas MV,et al.Genetic st r uct ures at theor igin of acquisit ion of the bet a-lact amase bla KPC gene[J ].Antimicrob Agents Chemother,2008,52（4）：1257-1263.
（收稿日期：2013-01-05）
总结：此文是一篇基因耐药论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。
耐药基因检测引用文献:
[1] 仿制药含量检测论文
[2] 结核病大学毕业论文范文 关于耐药结核病方面毕业论文格式范文10000字
[3] 措施在职研究生论文范文 多重耐药菌相关论文写作技巧范文2万字
