简介:本文是关于糖尿病肾病和泻药类大学毕业论文范文跟泻药类大学毕业论文范文.
摘 要：目的：探讨蒙医“蒜变剂”泻药对II型糖尿病肾病小鼠微炎症的抑制及肾功能改善.方法：将实验动物随机分为正常组、II型糖尿病肾病模型组、阳性对照组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,通过检测尿微量白蛋白和荧光探针标记技术观察各组动物肾小球滤过率情况,制备病理组织切片HE染色观察动物组织病理结构改变,运用透射电镜技术观察肾脏超微结构改变.结果：60mg/kg蒙医“蒜变剂”泻药可显著提高II型糖尿病肾病小鼠的肾小球滤过率,修复肾小球基底膜功能,抑制肾间质纤维化,抑制肾小管上皮细胞足细胞广泛融合或丢失,降低电子致密物堆积.结论：蒙医“蒜变剂”泻药可有效抑制II型糖尿病肾病小鼠微炎症.
关键词：II型糖尿病肾病;蒙医蒜变剂泻药;微炎症
中图分类号：R291.2;R781.6+4 文献标识码：A 文章编号：1673-260X（2020）05-0030-05
糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）又称糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）,是1型和2型糖尿病（T1DM和T2DM）患者的一种严重并发症[1].糖尿病的流行已达到流行病的程度,并在全球范围内继续迅速增加,预计到2040年这一数字将上升到6.42亿.虽然T1DM和T2DM的患病率都在增加,但最显著的增加是在T2DM患者中.糖尿病对健康有实质性的影响,并且个人和社会要为此承受巨大的经济负担[2],虽然一些现有的治疗干预可以延迟糖尿病肾病的发病和进展,但糖尿病肾病的发病率仍然很高,需要新的治疗方法.
DN特征是血压逐渐升高,肾小球滤过率下降,为高风险心血管事件[3].DN的发病机制非常复杂.持续性蛋白尿是糖尿病肾病的标志,故其传统诊断上以微量蛋白尿为基础[1].肾小球滤过率（GFR）是肾功能评估的金标准,用于确定肾脏疾病的进展和药物诱导的肾脏毒性.评估GFR最常用的方法之一是测量血液中被标记菊粉的消失速率;由于菊粉在肾脏肾小球中被完全过滤（既不分泌也不被小管吸收）,所以其消失率与GFR成正比.DN的病理变化主要有：肾小球系膜区基质增多,肾小球基底膜（glomerular basement membranes,GBM）增厚,弥漫性或结节性硬化,细动脉较明显玻璃样变性,部分病例标本在毛细血管壁有细线状IgG沉积,肾小管较突出的病理变化是上皮细胞泡沫状改变.透射电镜超微结构病变特点有：GBM不同程度均质性增厚,系膜基质增多,可见足突细胞融合,无电子致密物沉积和细胞增生性改变[4,5],当机体发生肾小球肾炎时常常伴有电子致密物沉积和细胞增生性改变[6].
经典蒙医“蒜变剂”泻药以大蒜、金柯子、肉蔻、红花、巴豆、冰片、牛奶等组成的制剂,取后以水煎、过滤、浓缩而成.在临床上治疗肾病综合征局灶性病变、微小病变型肾病有着确切疗效[7,8].本研究试图探讨该药剂对小鼠II型糖尿病肾病的治疗效果,并对其分子机制进行初步研究.
1 材料
1.1 实验动物
购买7-8周龄雄性35只小鼠,其中db/m小鼠5只,II型糖尿病db/db小鼠30只（北京大学医学部）.将小鼠饲养于温度22～25℃、湿度65%的饲养室内,昼夜轮替交换光照12h.
1.2 药物及试剂
药物成分：蒙医“蒜变剂泻药”是以大蒜、金柯子、肉蔻、红花、巴豆、冰片、牛奶等组成.制作方法,水煎、过滤、浓缩至2.5g/mL,装入瓶中待用.
实验试剂：荧光探针GFR-Vivo 680（PerkinElmer,NEV30000）,4%多聚甲醛（国药集团化学试剂有限公司）,2.5%戊二醛固定液（SPI,100703）,苏木素伊红染色液（雷根生物,DH0006）,812包埋剂（SPI,90529-77-4）.
1.3 主要仪器
活体近红外光学成像系统（SWIR 1.0）,全自动生化分析仪（日本日立公司,7020）,脱水机（武汉俊杰電子有限公司,-12）,包埋机（武汉俊杰电子有限公司,JB-P5）,病理切片机（上海徕卡仪器有限公司,RM2016）普通光学显微镜（Leica,NikonEclipseTi-SR）,超薄切片机（Leica,UC7）,切片刀（Daitome,Ultra 45°）,透射电子显微镜（FEI公司,TECNAI G 20 TWIN）.
2 方法
2.1 模型建立
在动物房适应饲养1周后,用0.6%钠按照10ml/kg剂量按体重进行腹腔注射麻醉,去除背部毛发,小鼠俯卧,绑定小鼠四肢,用75%酒精涂抹裸露皮肤处后,涂碘伏消毒,找出肾的大约位置,切开皮肤及肌肉层约1cm,翻开肾周脂肪,找出左侧肾动脉和静脉及输尿管进行结扎,然后切除肾脏,依次缝合肌肉层和皮肤,再次消毒,将小鼠放入笼子,待清醒,术后将小鼠单独饲养,术后3d内每天腹腔注射抗生素预防感染.
2.2 药物干预
糖尿病肾病小鼠模型建立成功后,将动物随机分为正常对照组、II型糖尿病组、II型糖尿病肾病组、强的松组、蒙医“蒜变剂”泻药低剂量组（L）,蒙医“蒜变剂”泻药中剂量组（M）,蒙医“蒜变剂”泻药高剂量组（H）,强的松组、蒙医“蒜变剂”泻药组（L）,蒙医“蒜变剂”泻药组（M）,蒙医“蒜变剂”泻药组（H）分别给予30mg/kg强的松、30mg/kg蒙医“蒜变剂”泻药、60mg/kg蒙医“蒜变剂”泻药、90mg/kg蒙医“蒜变剂”泻药,正常对照组、II型糖尿病组和II型糖尿病肾病组分别灌胃给予等量的生理盐水,每组5只,每天固定时间灌胃一次,连续给药7天.
2.3 检测指标
2.3.1 尿微量白蛋白（mAlb）检测
分别于干预第3、6天将鼠放入小鼠代谢笼,收集动物尿液,用比色法测定小鼠24h尿微量白蛋白.
2.3.2 肾小球滤过率检测
每组小鼠连续给药7d后,尾静注射2nmol荧光探针GFR-Vivo 680（溶于100μL无菌PBS中）,45min后于活体近红外光学成像系统680nm荧光波长下检测信号,观察并比较不同处理组荧光变化情况.
2.3.3 HE染色观察病理变化
取肾脏组织,4%多聚甲醛固定48h,水洗过夜,梯度酒精脱水,石蜡包埋,制成4μm厚的石蜡切片,行HE染色,用光学显微镜在20倍物镜下观察拍照.
2.3.4 透射电镜观察肾组织形态学变化
将切好的肾脏组织置于2.5%的戊二醛固定液中4℃过夜,再用1%锇酸磷酸缓冲液室温固定2h,梯度酒精脱水,依次经丙酮：环氧树脂（2：1）、丙酮：环氧树脂（1：1）、环氧树脂渗透,37℃温箱内,每次渗透8～12小时,之后用环氧树脂包埋,60℃温箱中聚合48小时,超薄切片机切片80nm厚,铀铅双染色,室温干燥,电镜下观察、拍照.
3 统计学方法
实验数据以x±s表示,应用统计分析软件SPSS22.0对变量型实验数据进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析,经bonferroni校正,事后检验,进行两两多重比较,显著水平α等于0.05,置信区间为95%,当分析结果P<0.05时,差异具有统计学意义.
4 结果
4.1 mAlb变化
各组动物mAlb结果如表1所示.与正常组比较,DN组的mAlb明显升高,且差异具有显著性（P 等于0.0001）;高剂量组与DN组比较,mAlb明显降低,差异显著,具有统计学意义（P<0.0001）.
4.2 GFR变化
各组动物GFR变化情况如图1所示.正常组和T2DM小鼠肾小球滤过功能完全正常,而DN组GFR却显著下降,阳性对照强的松组较DN组改善显著,蒙医“蒜变剂”泻药低剂量组效果较差,中剂量组所有缓解,高剂量组效果最好.说明该药物可以修复肾小球基底膜,改善肾小球渗透滤过功能.
4.3 病理组织形态变化
各组动物肾脏病理结构变化如图2所示.与正常组比较,T2DM组肾小管可见明显扩张,明显管状缘脱落,部分肾小球可见明显萎缩坏死,组织未见明显炎症细胞浸润;DN组肾小管可见明显扩张及明显管状缘脱落,组织可见少量炎症细胞浸润;强的松组肾小管可见轻微扩张,明显管状缘脱落,肾小球结构清晰可见,部分肾小球可见明显萎缩,组织未见明显炎症细胞浸润;高剂量组肾小管上皮细胞未见明显脱落水肿坏死,肾小球结构清晰可见,未见肾小球明显肿胀萎缩,组织未见明显炎症细胞浸润.由此可见,蒙医“蒜变剂”泻药对DN有显著的病理改善作用.
4.4 肾脏组织超微结构变化
各组小鼠肾脏组织超微结构变化如图2所示.正常组肾小球整体结构正常,GBM系膜未见明显增厚,脏层上皮细胞足突排列整齐,未见弥漫性融合,系膜区未见明显电子致密物沉积.与正常组比较,TADM组GBM可见少量电子致密物堆积,组织可见系膜细胞,足细胞明显异常增生.DN组肾小球整体结构异常,脏层上皮细胞内细胞器排列紊乱,可见大量线粒体脊断裂,GBM可见明显增厚,足突可见弥漫性融合,GBM可见明显电子致密物沉积.强的松组肾小球整体结构基本正常,GBM系膜未见明显增厚,脏层上皮细胞足突排列较整齐数量较多,未见明显融合,但基底膜可见明显电子致密物堆积.高剂量组肾小球整体结构基本正常,GBM系膜未见明显增厚,脏层上皮细胞足突排列整齐,足细胞足突良好,未见弥漫性融合GBM可见明少量电子致密物沉积,而中剂量和低剂量组效果稍差.由此可见,该药物不仅对肾病综合征有良好效果,在炎症抑制方面也有强大作用.
5 讨论
据统计,大约30-40%患者的糖尿病会发展为肾病.糖尿病肾病（DN）的发病原因非常复杂.DN是最常见的慢性肾脏疾病,是终末期肾脏疾病的主要病因.慢性糖尿病的发生与机体代谢及血流动力学压力等有关,这些压力可促进DNA、蛋白质和脂质的改变,诱导细胞产生功能障碍,从而促进机体炎症和纤维化的发生,导致各种类型的肾损伤.大量实验和临床研究证据表明,肾脏炎症在糖尿病患者肾损伤进展中具有决定性作用[9].
DN與全身性和局部性肾脏炎症有关.随着疾病的发展,在早期糖尿病肾病患者机体血清或外周血中检测到的炎性细胞因子（如白细胞介素IL-1β、IL-6,肿瘤坏死因子TNF-α,单核细胞趋化因子蛋白MCP-1,巨噬细胞炎性蛋白MIP-1β）和免疫调节因子（如粒细胞单核细胞集落刺激因子GM-C,胞内粘附因子ICAM-1,髓样分化因子MyD88）水平显著升高[10].此外,糖尿病患者肾活检的组织学分析表明,糖尿病肾病是由三种肾小球病变构成的：肾小球基底膜增厚、肾小球系膜扩张和小动脉玻璃样变性[11].肾小球硬化的进展是糖尿病肾病的主要组织学特征,其他组织学特征包括足细胞脱离肾小球基底膜、足细胞丢失、肾小球小管连接异常、肾小球数目减少、肾小球肥大、肾小管萎缩和间质纤维化,其中,足细胞丢失与2型糖尿病患者蛋白尿水平密切相关,肾小球数量降低和肾间质纤维化与肾小球滤过率下降密切相关[9].肾活检分析显示,糖尿病肾病的肾小球和间质均存在炎症细胞,并与肾小球硬化、肾小管萎缩和间质纤维化相关[12,13].
DN是2型糖尿病（T2D）的主要并发症,是决定糖尿病患者死亡率的关键因素.开发既能控制T2D又能预防DN发展的新型治疗药物具有重要意义[14].民族传统医学根植于各民族传统文化土壤,几千年来形成了丰富的诊断和医疗系统,积累了丰富的临床经验,具有独特的医药理论体系.民族药是中国民族传统医药的重要组成部分,在我国少数民族地区甚至全国的现代医疗体系中发挥着重要作用[15,16].在蒙医临床用药中发现,蒙医“蒜变剂”泻药对肾病相关疾病有着良好的预后和奇特功效.本文研究结果看出,糖尿病肾病小鼠口服90mg/kg蒙医“蒜变剂”泻药,可以促进肾小球基底膜修复,提升肾小球滤过率,降低尿液中微量白蛋白水平,抑制肾小球炎症发生和肾间质纤维化过程.初步判断,该药物是通过抑制机体肾脏炎症来发挥其作用,但具体作用的蒙药药物成分和机理还不清楚,需进一步深入研究探讨.
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总结：该文总结,这是一篇关于糖尿病肾病和泻药方面的大学硕士和本科毕业论文以及泻药相关糖尿病肾病和泻药论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料.
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