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（黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔 161006）
摘 要：血清抗体的检测对于疾病诊断、免疫效果的评估和免疫时机的选择等具有重要意义.本文就血清学方法在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、圆环病毒、细小病毒、口蹄疫等病毒抗体检测中的应用进展做一综述.
关键词：血清学；猪；病毒；抗体检测；应用进展
随着养猪业的发展,猪群的密度越来越大,导致猪病越来越错综复杂,而在多重感染的疾病中,80%是病毒病,病毒性疾病已占据首要位置[1].因此,对病毒病的诊断变得尤为重要.病毒性病原的常规诊断方法有病毒分离、电镜观察、核酸探针、论文范文酶链式反应、血清学等方法.而目前临床上最为常用的方法就是血清学检测技术,血清抗体的检测对于疾病诊断、免疫效果的评估和免疫时机的选择等具有重要意义,对于建立猪场的基准线、建立疾病预警系统也非常重要[2].本文就血清学的类型及血清学方法在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、圆环病毒、细小病毒、口蹄疫等病毒抗体检测中的应用进展做一综述.
1. 血清学检测技术
1.1 检测原理
病原微生物（病毒、细菌及其他微生物）均可以刺激机体产生相应的抗体,这种抗体与其相应的抗原能够发生特异性反应,血清学方法就是建立在这特异性反应基础上的检测技术.
1.2 类型
主要有凝集试验（包括间接凝集、直接凝集）,沉淀试验（包括絮状沉淀试验、琼脂扩散试验、免疫电泳）,补体结合反应、中和试验、免疫标记抗体反应（包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体等）.
2. 血清学方法在猪病毒抗体检测中的应用
2.1 猪瘟
猪瘟病毒抗体检测方法主要有正向间接血凝试验（IHA）,间接ELISA、Dot-ELISA、胶体金免疫层析试纸条（GICA）、琼脂扩散试验（GDP）等.马超英[3]应用四种方法分别对142份猪血清样品检测,结果显示,间接ELISA灵敏性最高,IHA法对血清要求高,灵敏性稍低,Dot-ELISA与GICA操作简单,但灵敏性最低.方先珍等[4]用三种方法对65份猪血清样品检测,结果表明,间接ELISA和IHA的符合率为89.23%,而间接ELISA与阻断ELISA的符合率为47.69%,IHA与阻断ELISA的符合率为50.77%,这与其检测血清抗体的类型不同有关.
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2.2 猪繁殖与呼吸综合征
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体检测方法有免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）,ELISA、GICA等.Wensvoort G等首次建立起PRRSV血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）检测方法,至今是欧洲许多国家使用的血清学诊断方法.IPMA不仅能够检测病毒抗原,也可检测病毒抗体.ELISA作为目前普遍应用的免疫检测技术,可用于检测PRRSV抗体,主要通过S/P值分析猪群抗体水平的稳定性及猪群的健康状况.王刚等1996年通过细胞培养PRRSV,利用NC膜作为载体,成果建立起检测PRRSV抗体的Dot-ElISA.据报道,国产ELISA试剂盒在PRRSV感染后8天内可检出感染抗体,比国外的试剂盒提前10天,具有较高的可靠性.
2.3 伪狂犬
伪狂犬病毒（PRV）抗体检测法有ELISA、GICA法、乳胶凝集试验（LAT）等.gE-ELISA是一种灵敏度很高的ELISA,它是根据疫苗株缺失的糖蛋白构建的一种鉴别ELISA.由于涉及全病毒,因此存在一定的安全隐患,Kimman等于1996年改进此法建立起一种间接双抗夹心gE-ELISA.黄骏明等应用混合纤维素酯微孔滤膜作为固相支持物建立了Dot-ELISA,而中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制的Dot-ELISA试剂盒已经投入使用.王生育等应用ELISA试剂盒与GICA两种方法对64份猪血清样品进行伪狂犬病毒抗体检测,结果表明两种方法检测的抗体阳性率均为62.5%,两种方法都具有微量、特异、准确的优点.LAT利用抗原抗体特异性结合的性质,根据能否发生凝集反应来判定是否存在伪狂犬病毒感染,市面上已有LAT试剂盒销售.
2.4 圆环病毒
圆环病毒2型（PCV-2）抗体检测法包括竞争ELISA、间接ELISA、GICA法、间接免疫荧光试验（IFA）等.Walker等利用PCV-2的特异性单克隆抗体,建立了竞争ELISA检测PCV-2抗体,该法的灵敏性和特异性达到99.58%和97.14%.欧阳素贞等采用间接ELISA进行PCV-2感染的血清抗体检测,测得断奶仔猪PCV-2血清抗体阳性率为49.5%；育肥猪为51.4%；后备母猪为20.65%；经产母猪为54.5%.王慧杰等通过对PCV-2衣壳蛋白基因的羧基端进行克隆和表达后,结合胶体金免疫技术建立起来的抗体胶体金诊断方法,具有较强的特异性,能区分PCV-2的标准阳性和阴性血清.芦银华等应用IFA法检测国内一些规模化猪场血清,结果表明PCV-2感染普遍存在.由于该法所需仪器较昂贵,故一般仅适合于PCV-2的实验室诊断.
2.5 细小病毒
细小病毒（PPV）抗体检测法有血凝试验（HA）,血凝抑制试验（HI）,LAT、血清中和试验（SN）等.由于血凝素在环境中不会轻易破坏,加之操作简便,成本低廉,HA成为实验室常用检测PPV方法之一.HI对样品处理繁琐,影响因素较多,适合做定性检测.LAT采用猪细小病毒培养液致敏乳胶抗原,遇到待检抗体时,就可以形成抗原抗体复合物,乳胶抗原会呈现肉眼可见的颗粒状,由此来检测猪血清中的抗体.何启盖等用LAT与HI检测了203份猪血清样品,结果表明,两种方法阳性率均达到93.16%,LAT可用于临床大量血样进行HI前的初选.SN原理是利用被检血清的抗体中和PPV,然后根据培养细胞的病变情况计算出血清抗体的滴度,但操作复杂,并没有被广泛采用.
2.6 口蹄疫
口蹄疫病毒（FMDV）抗体检测法包括IHA、间接ELISA、VP1结构蛋白ELISA等.高得吼等改进了原IHA,采用简化的IHA进行牛和猪口蹄疫O型免疫抗体检测试验,结果显示,免疫合格率分别达到97.5%和92.5%,既加快了操作速度,又降低了检测成本.卢顺等应用包含有O型口蹄疫病毒VP1上主要抗原表位的原核表达蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法确定抗原最佳包被浓度和血清稀释度,优化条件,研制出的试剂盒与上海优耐特VP1结构蛋白 ELISA试剂盒同时检测220份临床猪血清,结果表明两者总符合率达87.27%
3. 小结
市面上的免疫胶体金试纸由于误差较大,不（下转第83页）能量化,结果不太可靠.目前大多数实验室采用的检测抗体的方法是ELISA,该法操作规范,结果可靠,数据可通过计算机存储并便于分析.当然,每种检测方法都有自己的优点和局限性.完成一次诊断监测工作,往往需要综合运用几种方法,才能获得及时、完整的诊断监测结果.根据检测工作的性质、工作量和疫病控制的需要,可以采取不同的技术方案.
上面所提到的几种血清学方法,由于操作过程不同,干扰因素也不同,甚至结果的表示涵义也不尽相同.当采用不同方法测定同一样品时就会产生结果不可比的问题,因此,检测方法的标准化有必要进行.同时需要严控产品生产过程,控制检测条件,避免检测仪器的系统误差及运行期间的偏差.
参考文献
[1] 孙友德,王玉东,张学忍.当前主要猪病的流行趋势及流行原因分析[J].山东畜牧兽医,2010,（10）：33-35.
[2] 程果,苗连叶.血清学检测技术在猪病防控中的应用[A].河南：中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C].2010：107-109.
[3] 马超英.4种猪瘟病毒抗体检测方法的比较[J].动物医学进展,2012,33（10）：128-131.
[4] 方先珍,胡慧,郑立运,等.不同猪瘟抗体检测技术的应用比较[A].河南：中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C].2010：311-314.
总结：本文是一篇关于抗体检测论文范文，可作为相关选题参考,和写作参考文献。
抗体检查引用文献:
[1] 梅毒抗体检测室间质评论文
[2] 梅毒螺旋体抗体检测论文
[3] 教育部检查论文检测
