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肺移植是目前某些终末期肺部疾病的惟一有效的 治疗手段‘¨,在开展较好的中心内肺移植1年存活率 可达90%,但是传统供肺多来自有心跳供体 ( HBD).很显然,有心跳供体的来源极其有限.若 “无心跳供体”肺能够安全应用于临床肺移植,将会极大地缓解供体肺的缺乏.本实验旨在通过测定和比较HBD肺和温缺血1 h的无心跳供体(NHBD-1 h)肺细支气管舒缩功能和上皮依赖性舒张( EpiDR)能力,来探讨NHBD-1 h肺用于肺移植的可行性.
材料与方法
1．材料：7E型Grass多道生理记录仪、FT03 D型张力传感器（美国Grass医疗器械公司）；肌动描记仪Myograph（瑞典隆德大学医院医疗器械科论文范文）；LEI-KA WildM691型手术显微镜（瑞士Wild Leitz公司）；Zeiss Stemi 1000型手术显微镜、目镜定标器（德国Zeiss公司）；TM-147T型双屏电子温度计（美国Elec-tromedics公司）；H18417型PH计（英国Hanna医疗器械公司）；91-02型PH电极（英国Thermo Orion Europe公司）.
2．实验分组与标本制作：健康瑞典家猪16头,雌雄不拘,体质量(26.9±1.2)kg,随机分为HBD组和NHBD-1 h组.HBD组：麻醉及全身肝素化后,侧开胸取出一侧全肺灌注4℃LPD液,呼气末切取小块周边肺组织,置人4℃充有氧气的Krebs溶液中,手术显微镜下采用不触及支气管的游离技术,游离并取出内径约1.5 mm的支气管段,截至1.5 mm长的无分支的支气管环,整个标本制备过程少于20 min.NHBD-I h组：诱导心室纤颤后,置其于室温中1 h后再如上法灌注、取肺和制作标本,余操作同HBD组.根据是否加入花生四烯酸钠将各组再分为A亚组和B亚组.
3．实验方法：每次实验时,先将支气管环置入浴槽液中温浴浸泡30 min,然后在手术显微镜下将支气管环悬挂于两个平行的I形的金属挂钩上.悬挂时显微镊只能夹持支气管外膜,避免触碰金属挂钩和损伤支气管内膜.一端挂钩连接张力传感器,并与7E型Grass多道生理记录仪连接,用于持续测定支气管等长张力,另一端与一个可移动微调装置相连,精细调节两挂钩间的距离进而调节支气管张力.每次实验时需将支气管环在器官浴槽中平衡2.5 h,反复通过微调装置牵拉扩张支气管环将支气管张力调节至生理稳态下的基础张力.基础张力的达成通过多次牵拉支气管环后都能重新恢复至相同范围的张力值内,此值即为基础张力值.此基础张力与正常情况下的支气管平滑肌张力相似,根据受测支气管的大小和物种的不同也各有差异,反复实验验证后得知此类型支气管环在本实验条件下的基础张力为(5. 50 +0. 15) mN.调节支气管张力期间每15 min更换浴槽中的Krebs溶液1次,支气管环张力经张力传感器放大以后进行描记.
支气管环在器官浴槽内经过2.5 h的平衡后,将张力曲线拉至基线处,以便直观地进行观察.随后在器官浴槽里加入乙酰胆碱,使浴槽内乙酰胆碱浓度达到l X 10-5 mmol/L,在乙酰胆碱诱导的收缩达到坪值后,用Krebs溶液反复冲洗直到恢复基础张力,再用相同浓度的乙酰胆碱诱导第2次收缩达到坪值,称作预收缩值.当预收缩达到坪值后,向A亚组加入浓度为0.01%的花生四烯酸钠溶液,观察其诱导的EpiDR,记录舒张值.此外,观察作为组内对照的B亚组是否有自发性舒张反应的产生.最后,向花生四烯酸钠没有诱导完全舒张的A亚组和空白对照的B亚组中,加入盐酸论文范文碱,使浴槽内浓度达到1 X 10—4 mmol/L,检验支气管平滑肌非上皮依赖性舒张反应的能力.
4．统计学方法：乙酰胆碱诱导的收缩反应值通过计算预收缩值与基础张力之间的筹值获得.花生四烯酸钠诱导的EpiDR反应的大小用乙酰胆碱诱导的预收缩值的减少值来表示.数据以均数±标准差（x+s）表示,采用SPSS 11.o统计软件进行2检验及方差分析.
结
果
1．肺支气管环的内径：HBD-A、HBD-B、NHBD-1h-A、NHBD-1 h-B四组支气管环内径分别为(1. 53±0. 11)、(1. 52±0.09)、(1. 52 +0. 12)、(1. 50±0.08)mm,经统计学分析,各亚组支气管内径的差异无统计学意义（尸>,0. 05）,所获取的支气管环标本均一、可靠.
2．支气管平滑肌的收缩功能：比较HBD和NH-BD-I h两组中由乙酰胆碱诱导的支气管环预收缩值(5. 18 +0. 07) mN LL(s. io±0.i1) mN．可知在NH-BD-I h组中由乙酰胆碱诱导的预收缩值比在HBD组中稍偏低,但两者差异无统计学意义（尸>,0. 05）.
3．支气管上皮依赖性舒张反应的能力：花生四烯酸钠可以引起有完整上皮的组织强效舒张和去L-皮组织的收缩.在NHBD-1 h和HBD的A亚组中,花生四烯酸钠均引起支气管环发生舒张反应,证明两组均保持完整的上皮结构,可排除实验操作损伤因素.比较HBD和NHBD-I h的A亚组中支气管环的上皮依赖性舒张能力,两组最大舒张值分别为(1. 26 +0. 05) mNLk(1. 23 +0. 07) mN,显示经过l h的温缺血后,NH-BD-I h肺支气管发生的舒张反应虽然比HBD稍偏低,但两组差异无统计学意义（尸>,0. 05）.
支气管舒张试验:杨奕老师谈治疗肺部疾病和支气管炎
4．A亚组舒张反应前后B亚组肺支气管的张力变化：HBD组中A亚组在舒张前与舒张后时,记录B亚组的支气管张力值分别为(5. 18±0.10) mN LC(5. 20 +0. 11) mN,NHBD-1 h组中A亚组舒张前与舒张后时B亚组支气管张力分别为(5. 10 +0. 06) mN比(5. 11 +0. 07) mN,两组支气管环的A亚组在花生四烯酸钠诱导EpiDR反应的同时,作为空白对照的B亚组的支气管环张力前后差异均无统计学意义(尸>,0. 05),提示两组气管环在诱导EpiDR过程中,均未发生自发性舒张,排除了自发性舒张对花生闪烯酸钠诱导的EpiDR反应的干扰.
5．支气管平滑肌的舒张功能：盐酸论文范文碱可以直接作用支气管平滑肌引起强效的舒张反应.在HBD和NHBD-I h组内,向花生四烯酸钠没有诱导完全舒张的A亚组和没有加入L皮依赖性舒张剂的B W-组中,加人盐酸论文范文碱,使浴槽内浓度达到1 X 10叫mmol/L,均能获得完全舒张.
讨
论
当前,肺移植无法广泛开展的最主要障碍是满意供体的严重短缺.在传统的肺移植中,通常使用的移植肺都来自循环完整的脑死亡患者r3,.B吨hamL曾一度认为,心跳停止后的肺脏是一种“休克肺”,不能用作供体肺.1986年,Lechner等培养从尸体中获得得肺上皮细胞获得成功,这一结果提示：血液循环停止后,完整肺功能的可恢复性将提供足够的气体交换,完全可以使得肺移植取得成功.近年来,无心跳供体肺的研究成为肺移植中具有重要意义的课题,于是很多学者站在不同的角度运用不同的方法对温缺血供体各项功能进行检测.如廖东山等建立大白鼠无心跳供体左肺原位移植模型,通过检测受体存活时间、移植后肺顺应性、超微结构等指标说明无心跳供体肺温缺血30 min后仍然适于肺移植,依靠动物实验模型进行对无心跳供体肺功能的研究.
本实验采用的器官浴槽等长记录实验模型已经被证明在血管内皮依赖性舒张( EDR)和平滑肌的功能评价方面非常可靠7／.器官浴槽内盛有37℃、持续氧合的Krebs溶液,为实验中支气管环功能的测定提供了正常的生理环境,并且为建立离体支气管生理研究的体外模型提供了独特的可能性.而实验结果也显示了研究所用的实验条件和支气管环游离技术没有损害到支气管的上皮功能,因为花生四烯酸钠诱导了稳定的舒张,显示了上皮功能的完整.证明器官浴槽等长记录实验模型在支气管结构功能评价方面也是可靠的.
自2001年瑞典隆德大学医院Steen等l8,利用1例无心跳供体肺完成了肺移植,很大程度上推动了全球肺移植工作的发展,其巨论文范文功充分说明了利用尸体肺作为供体的可行性.而本实验运用器官浴槽模型也验证了th温缺血后肺支气管基础结构和舒缩功能的完整,实验结果与临床肺移植的结果对照,进一步说明了实验模型的可靠性以及NHBD-I h肺用于肺移植的可行性.
肺功能是受血管、支气管、内分泌等多种因素调节的,虽然我们不能断然凭借支气管的功能完整就推测肺的功能是完整的,但是本研究为临床肺功能的检测以及临床不同种类肺移植供体的筛选提供了一个科学的方法,同样也可以利用此研究方法进一步检测其他相关功能,使肺功能的检测更加完善.
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支气管舒张试验引用文献:
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