简介:该文是有关胰蛋白酶论文范文文献跟蛋白酶有关毕业论文格式范文.
摘 要：以酶解液水解度（hydrolysis degree,DH）、三氯乙酸（trichloroacetic acid,TCA）可溶性氮含量及血红素残留量为评定指标,采用单因素试验比较胰蛋白酶和碱性蛋白酶对猪血红蛋白的酶解脱色效果.在单因素试验基础上,进行4因素3水平正交试验.结果表明：胰蛋白酶水解脱色的效果更好,最佳酶解工艺参数为酶底比7 500 U/g、酶解温度45 ℃、pH 7.5、底物质量浓度8 g/100 mL,在此条件下,酶解液DH为25.67%,TCA可溶性氮含量为80.05%,血红素残留量为18.34%,猪血红蛋白多肽粉蛋白含量83.17%;对此条件下制备的猪血红蛋白多肽粉进行分子质量分布分析,分子质量在1 000 Da以下的小肽占比94.20%;最佳酶解脱色条件下,猪血红蛋白多肽粉中TCA可溶性氮含量为80.05%的蛋白占猪血红蛋白多肽粉蛋白含量的96.25%,这与分子质量分布结果比较符合.
关键词：猪血红蛋白;酶解;水解度;三氯乙酸可溶性氮;血红素
Abstract： This study comparatively evaluated the decolorization efficiency of porcine hemoglobin with trypsin and alkaline protease based on hydrolysis degree （DH）, trichloroacetic acid （TCA） soluble nitrogen content and heme residue. Trypsin was determined to be more suitable for decolorizing porcine hemoglobin than alkaline protease. Using a four-factor, three-level orthogonal array design, the optimal hydrolysis conditions for decolorizing porcine hemoglobin by trypsin were determined as follows： enzyme/substrate ratio 7 500 U/g, temperature 45 ℃, pH 7.5, and substrate concentration8 g/100 mL. Under these conditions, the DH was 25.67%, and the TCA soluble nitrogen content, heme residue and total protein content of the peptide obtained powder were 80.05%, 18.34% and 83.17%, respectively. Molecular mass distribution analysis showed that all peptides with molecular masses less than 1 000 Da accounted for 94.20% of the peptide powder. TCA soluble nitrogen accounted for 96.25% of the protein content in the peptide powder, which is quite consistent with the results of molecular mass distribution.
Keywords： porcine hemoglobin; enzymatic hydrolysis; degree of hydrolysis; trichloroacetic acid soluble nitrogen; heme
DOI：10.7506/rlyj1001-8123-20200904-217
中圖分类号：TS251.9文献标志码：A 文章编号：1001-8123（2020）10-0019-07
猪血是生猪屠宰加工过程中的副产物之一,每头猪的猪血约占体质量的3.0%～3.5%[1].猪血中蛋白质含量高达17%～21%,高于人乳和全蛋,其氨基酸组成平衡,含人体所需的8 种必需氨基酸在内的18 种氨基酸,尤以赖氨酸和亮氨酸含量较高[2-3],是一种优质蛋白质资源.猪血红细胞的蛋白含量高达38%,其中92%以上是血红蛋白,但由于色泽猩红、腥味重、适口性差等特点[4],我国对猪血红蛋白的利用率并不高,除小部分被加工成血粉或发酵血粉作为饲料添加剂及用于生化制药生产血红素、超氧化物歧化酶、蛋白胨外,相当大一部分被作为废弃物,既造成巨大浪费,又污染环境.随着酶技术的迅速发展,利用蛋白酶水解猪血红蛋白以提高其利用率的研究也越来越多[5-7],开展血红蛋白的精深加工研究对大规模利用血红蛋白资源具有重要意义.
血红蛋白经酶解技术水解而成的血红蛋白多肽,不仅分子质量小,有很好的溶解性、低黏度、抗凝胶形成性,而且在体内消化吸收快、蛋白质利用率高、具有低抗原性、不会产生过敏反应[8].猪血红蛋白肽的蛋白质含量在80%以上,利用率在90%以上,具有抗氧化[9-10]、抗菌[11-12]、降血压[13-15]、降血脂[16]、缓解疲劳[17]、改善免疫功能[18-19]、改善缺铁性贫血[20-21]等重要生理活性.
目前,國内外猪血红蛋白脱色的方法主要有有机溶剂法、氧化法、高分子化合物絮凝法、机械法、综合法和蛋白酶水解法等,蛋白酶水解脱色被认为是最环保的一种方法,该方法不使用有机溶剂、实验设备要求简单、操作安全、副反应少、成本低、易于工业化大规模生产.血红蛋白经过酶解、酸沉去除血红素后会产生脱色效果[22],因此血红蛋白多肽很适合用于食品的营养强化、调整食品的结构、口感以及产品的色泽和外观,是一种非常有应用前景的食品原料.在欧美、日本等发达国家,猪血的利用率已达50%以上,主要是开发肽类试剂、肽类药物、功能性食品和食品添加剂[23].本研究以水解度（hydrolysis degree,DH）、三氯乙酸（trichloroacetic acid,TCA）可溶性氮含量及血红素残留量为指标,比较研究胰蛋白酶和碱性蛋白酶对猪血红蛋白的酶解脱色效果,优化得到最佳水解工艺条件,并对最佳水解条件下制备的血红蛋白多肽进行分子质量分布分析.
1.材料与方法
1、1 材料与试剂
新鲜猪血：于某屠宰公司屠宰过程中采集血液,并迅速加入柠檬酸钠（5 g/L）抗凝,4 ℃保存.
胰蛋白酶（250 U/mg）（生物试剂） 上海如吉生物科技发展有限公司;碱性蛋白酶（200 U/mg）（生物试剂） 北京奥博星生物技术有限责任公司;2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS） 美国Sigma公司;血红素标准品 上海源叶生物科技有限公司;L-亮氨酸（生物试剂）、磷酸二氢钠（分析纯）、磷酸氢二钠（分析纯） 成都市科隆化学品有限公司;其余试剂均为分析纯.
1、2 仪器与设备
HZ85-2磁力搅拌器 北京中兴伟业仪器有限公司;SB-5200DTDN超声波清洗机 宁波新芝生物科技股份有限公司;MP511 Lab pH计 上海三信仪表厂;BSA124S-CW电子分析天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司;HH-6数显恒温水浴锅 常州国华电器有限公司;UV1810S紫外-可见分光光度计 上海佑科仪器仪表有限公司;K9860全自动凯氏定氮仪 济南海能仪器股份有限公司;Centrifuge 5804离心机 德国Eppendorf公司;Waters 600高效液相色谱仪 美国Waters公司.
1、3 方法
1、3.1 猪血红蛋白多肽的制备工艺流程
新鲜猪血用4 层纱布过滤除杂,4 ℃、8 000×g离心10 min,收集下层血球,按照设计好的比例加入一定量的水,超声溶血20 min,用1 mol/L NaOH或HCl溶液调节pH值,调节恒温磁力搅拌器温度,加入蛋白酶搅拌酶解,酶解结束后100 ℃沸水浴10 min灭酶,快速冷却至室温,4 000×g离心10 min,收集上清液即为酶解液,取1 mL测定DH.调节酶解液pH值至4,升高温度至95 ℃保持至沉淀产生,4 000×g离心10 min,收集上清液进行干燥,烘干至恒质量的多肽样品研磨成细粉,用于测定TCA可溶性氮含量及血红素残留量.选出最佳工艺参数后在最佳工艺条件下用相同方法制备猪血红蛋白多肽粉,分别测定其DH、TCA可溶性氮含量、血红素残留量及分子质量分布.
1、3.2 血红蛋白酶解单因素试验
1、3.2.1 酶底比对酶解脱色效果的影响
取10 组,分别按2 500、5 000、7 500、10 000、12 500 U/g酶底比加入胰蛋白酶和碱性蛋白酶,酶解温度50 ℃、pH 7.0、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h.
1、3.2.2 酶解温度对酶解脱色效果的影响
取10 组,2 种酶分别在40、45、50、55、60 ℃条件下进行酶解,酶底比7 500 U/g、pH 7.0、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h.
1、3.2.3 pH值对酶解脱色效果的影响
取10 组,2 种酶分别在pH 6.0、6.5、7.0、7.5、8.0条件下进行酶解,酶底比7 500 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h,胰蛋白酶酶解温度45 ℃、碱性蛋白酶酶解温度50 ℃.
1、3.2.4 底物质量浓度对酶解脱色效果的影响
取10 组,2 种酶分别在底物质量浓度4、6、8、10、12 g/100 mL条件下进行酶解,酶底比7 500 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h,胰蛋白酶酶解温度45 ℃、pH 7.5,碱性蛋白酶酶解温度50 ℃、pH 8.0.
1、3.3 血红蛋白酶解正交试验
在单因素试验基础上,以DH、TCA可溶性氮含量及血红素残留量为指标,对酶底比、酶解温度、pH值和底物质量浓度4 个因素进行L9（34）正交试验.
1、3.4 DH测定
对Adler-Nissen[24]、焦宇知[25]等的方法稍加修改.取1 mL酶解液加入15 mL 1 g/100 mL 十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）溶液中,70 ℃保温15 min,从中取0.1 mL溶液加入4.5 mL 1 g/100 mL SDS溶液中得待测液.吸取0.1 mL待测液,加入2 mL 50 ℃预热的0.2 mol/L、pH 8.2磷酸缓冲液,加入1 mL 1 g/100 mL TNBS溶液,50 ℃避光反应60 min,加入4 mL 0.1 mol/L HCl终止反应,室温静置30 min后于340 nm波长处比色,带入标准曲线进行计算.以1 g/100 mL SDS溶液作为样品空白.用L-亮氨酸制作标准曲线,以L-亮氨酸浓度为横坐标（mmol/L）,吸光度为纵坐标,所得回归方程为y等于0.316 7x-0.008 8（R2等于0.992）.DH按式（1）计算.
式中：c為L-亮氨酸浓度/（mmol/L）;A为待测样品在340 nm波长处的吸光度;n为稀释倍数;V为酶解液总体积/L;m为酶解样品质量/g;C为酶解样品的蛋白质含量（经凯氏定氮法直接测定）/%;htot为原料蛋白质肽键总数,猪血红蛋白为8.3 mmol/g.
1、3.5 TCA可溶性氮含量测定
根据方俊[26]的方法稍加修改.准确称取1 g多肽粉样品,加入10 mL 10 g/100 mL TCA溶液,混合振荡后静置30 min,4 000×g离心10 min,用凯氏定氮法测定上清液中氮含量.
1、3.6 血红素残留量测定
采用紫外分光光度法[27],取0.2 g猪血红蛋白多肽粉样品,用0.l mol/L NaOH定容至100 mL,吸取10 mL用0.l mol/L NaOH定容至100 mL,以0.l mol/L NaOH作空白调零,于385 nm波长处测定吸光度,带入标准曲线进行计算.用血红素标准品制作标准曲线,以血红素质量浓度为横坐标（μg/mL）,以吸光度为纵坐标,所得回归方程为y等于0.059 6x-0.008 6（R2等于0.999）.血红素残留量按式（2）计算.
式中：V1为吸取样品溶液体积/mL;V2为样品定容体积/mL;m1为由回归方程换算得到血红素的量/g;m为样品质量/g.
1、3.7 血红蛋白多肽分子质量分布测定
根据吴悦[28]、姜惠敏[29]等的方法测定血红蛋白多肽分子质量分布.称取适量烘干至恒质量的血红蛋白多肽样品,溶于超纯水中,溶液质量浓度为0.015 7 g/mL,10 000×g离心20 min得上清样液.吸取样液2 mL,用流动相稀释至100 mL,用直径0.45 μm的微孔滤膜过滤后进样.
色谱条件如下：Waters 600高效液相色谱仪（配2487紫外检测器和M32工作站）;TSKgel 2000 SWXL色谱柱（300 mm×7.8 mm,10 μm）;柱温25 ℃;流动相：乙腈、水、三氟乙酸体积比45∶55∶0.1;检测波长220 nm;流速0.5 mL/min.数据处理及计算由Waters M32GPC软件自动进行.
以细胞色素C（Mw等于12 500 Da）、抑肽酶（Mw等于6 500 Da）、杆菌酶（Mw等于1 450 Da）、Gly-Gly-Tyr-Arg（Mw等于451 Da）、Gly-Gly-Gly（Mw等于189 Da）为标准品,做分子质量（Mw）校正曲线,得到分子质量与保留时间（t）的回归方程为lgMw等于5.441 8-0.054 1t（r等于0.996 0,P<0.01）.各标准品分子质量的对数值与其保留时间具有良好的线性关系,可以准确测定水解物中多肽的分子质量分布.根据氨基酸平均分子质量为128 Da,多肽分子质量除以128所得数值为多肽大小.
1、4 数据处理
所得数据均为平行测定3 次所得平均值,并计算标准差.运用Excel 2010软件进行图表处理、用SPSS 25软件进行差异显著性检验（Duncan’s法）.
2.结果与分析
2、1 猪血红蛋白酶解脱色单因素试验结果与分析
2、1.1 酶底比对猪血红蛋白酶解脱色效果的影响
由图1可知,各组酶解液的DH、TCA可溶性氮含量和血红素残留量随酶底比的变化差异显著（P<0.05）,各组酶解液的DH和TCA可溶性氮含量均随酶底比的增加而增加,而血红素残留量则随酶底比的增加而减小.酶底比超过7 500 U/g后,DH和TCA可溶性氮含量随酶底比的增加仍有所上升,但增幅较小,血红素残留量的下降幅度也较小.酶底比较小时,血红蛋白DH也较低.10 g/100 mL TCA溶液能够溶解四肽以下的小肽和氨基酸,而分子质量较大的多肽片段由于不能被溶解而形成沉淀,因此TCA可溶性氮含量是衡量水解液中小分子肽含量的重要指标.随着DH的增大,小分子肽含量随之增大.酶底比增大到一定程度后DH增幅减小的原因为：一方面,在底物质量浓度不变时,随着酶底比的增加,可以提高底物与酶的接触率,加快酶解反应进程,猪血红蛋白被充分水解为寡肽或游离氨基酸,提高DH[30-31];另一方面,当蛋白酶相对于底物过多时,酶添加量过高导致酶分子间的竞争性抑制[32],同时,随着反应的进行酶解产物含量提高,酶解产物与尚未作用的酶有可能形成复合物,阻碍底物与蛋白酶的相互作用,延缓水解进程[33],再增加酶底比意义不大.在水解过程中,血红蛋白水解越完全,包裹在血红蛋白疏水性内部的血红素暴露越充分,在加热酸沉时,血红素及相连的未被水解的多肽片段沉淀越多,水解液中残留的血红素就越少,脱色效果就越好.因此随着DH增大,TCA可溶性氮含量越高,血红素残留量就越低.在相同酶底比条件下,使用胰蛋白酶时的DH、TCA可溶性氮含量比用碱性蛋白酶时高,而血红素残留量比用碱性蛋白酶时低.从效费比的角度,选择胰蛋白酶,酶底比2 500、5 000、7 500 U/g进行正交试验.
2.1.2 酶解温度对猪血红蛋白酶解脱色效果的影响
由图2可知,胰蛋白酶和碱性蛋白酶对酶解温度的适应范围较广,在40～60 ℃均表现出明显的水解能力.酶解温度40～60 ℃,使用2 种酶时酶解液DH和TCA可溶性氮含量均先随酶解温度的升高显著上升（P<0.05）,血红素残留量先随酶解温度的升高显著下降（P<0.05）,然后DH和TCA可溶性氮含量又随酶解温度的升高而显著下降（P<0.05）,血红素残留量则随酶解温度的上升而显著上升（P<0.05）.胰蛋白酶在酶解温度45 ℃时的DH、TCA可溶性氮含量达到最大,显著高于其他处理组（P<0.05）,血红素残留量显著低于其他处理组（P<0.05）;碱性蛋白酶在酶解温度55 ℃时DH、TCA可溶性氮含量达到最大,显著高于其他处理组（P<0.05）,血红素残留量显著低于其他处理组（P<0.05）,但碱性蛋白酶在酶解温度50 ℃和60 ℃时DH差异不显著.在蛋白酶没有变性失活的前提下,提高温度会增强酶活性,加快酶促反应,DH增大;温度过高会造成酶变性失活,这是由于高温破坏维持蛋白酶分子结构的次级键,酶蛋白变性,造成酶活性降低[34-35],血红蛋白DH会降低,TCA可溶性氮含量减少,血红素残留量增加,脱色效果不佳.因此胰蛋白酶45 ℃条件下酶解脱色效果较好,碱性蛋白酶55 ℃条件下酶解脱色效果较好.对比2 种酶在其最适温度条件下的酶解脱色效果,使用胰蛋白酶的DH、TCA可溶性氮含量比用碱性蛋白酶时高,而血红素残留量比用碱性蛋白酶时低.因此,考虑到酶解温度过高会破坏蛋白酶的分子结构,选用胰蛋白酶,在酶解温度40、45、50 ℃进行正交试验.
2.1.3 pH值对猪血红蛋白酶解脱色效果的影响
由图3可知,酶解脱色效果受pH值的影响较大,主要是因为不同的酶有不同的最适pH值,过酸或过碱都会导致酶活性降低甚至失活.不同pH值条件下,蛋白质的解离状态不同,底物与酶的接触位点也不同,导致酶解产物不同[36].在pH 6.0～7.5时,胰蛋白酶酶解液DH和TCA可溶性氮含量均显著上升（P<0.05）,血红素残留量显著下降（P<0.05）;在pH 7.5～8.0时,胰蛋白酶酶解液DH和TCA可溶性氮含量显著下降（P<0.05）,血红素残留量显著上升（P<0.05）;pH 7.5时,胰蛋白酶酶解液DH、TCA可溶性氮含量达到最大值,显著高于其他处理组（P<0.05）,血红素残留量显著低于其他处理组（P<0.05）.
pH 6.0～8.0时,碱性蛋白酶酶解液DH和TCA可溶性氮含量始终显著上升（P<0.05）,并在pH 8.0时达到最大值;血红素残留量显著下降（P<0.05）,在pH 8.0時达到最小;pH 8.0时,DH、TCA可溶性氮含量显著高于其他处理组（P<0.05）,血红素残留量显著低于其他处理组（P<0.05）.pH值的改变会影响酶活性中心带电基团的电离,同时还会影响底物和辅酶的电离,从而影响酶分子对底物分子的结合和催化,因而只有在特定pH值范围内,酶、底物和辅酶的解离状态才最适宜它们相互结合,并发生催化作用,从而使酶解效果达到最好.因此胰蛋白酶选择pH 7.5为宜,碱性蛋白酶pH 8.0为宜.对比胰蛋白酶在pH 7.5及碱性蛋白酶在pH 8.0时的酶解脱色效果,胰蛋白酶酶解液的DH、TCA可溶性氮含量比用碱性蛋白酶时高,而血红素残留量比用碱性蛋白酶时低.因此,选用胰蛋白酶,pH 7.0、pH 7.5及pH 8.0条件下进行正交试验.
2.1.4 底物质量浓度对猪血红蛋白酶解脱色效果的影响
由图4可知,底物质量浓度为4～12 g/100 mL时,2 种酶解液的DH及TCA可溶性氮含量均先随底物质量浓度的增加而显著增加（P<0.05）,在底物质量浓度达到8 g/100 mL后,又随底物质量浓度的增加而显著减小（P<0.05）;血红素残留量则是先随底物质量浓度的增加显著减少（P<0.05）,在底物质量浓度达到8 g/100 mL后,又随底物质量浓度的增加而显著增加（P<0.05）.这是由于在底物质量浓度低于8 g/100 mL时,酶还没有被底物完全饱和,此时适量增加底物质量浓度,可以增加酶与底物的结合位点,酶分子与底物结合形成酶-底物复合物的数量增加,从而提高酶促反应速率,提高DH,与朱振宝等[37]采用酶解法制备核桃血管紧张素转化酶抑制肽时的变化趋势类似.当底物质量浓度继续增大时,在所有的酶分子与底物均形成酶-底物复合物后,酶促反应速率达到最大值,底物质量浓度过大时,会降低酶在溶液中的溶解度,使酶与底物的接触机会减少,酶解反应变弱,此时再增加底物质量浓度也不会提高反应速率,靳冬武等[38]在研究超高压酶解酪蛋白时也发现了类似趋势.此外,在实验操作中,猪血球溶液在底物质量浓度大于10 g/100 mL时黏稠度很大,流动性差,一方面不利于酶与底物结合,另一方面不利于解除产物对酶的反馈抑制,酶促反应无法向正反应方向推进.由此可得出底物质量浓度选择8 g/100 mL为宜.在底物质量浓度8 g/100 mL条件下对比胰蛋白酶和碱性蛋白酶的酶解脱色效果,使用胰蛋白酶时,酶解液DH、TCA可溶性氮含量比用碱性蛋白酶时高,而血红素残留量比用碱性蛋白酶时低.因此选用胰蛋白酶,底物质量浓度4、6、8 g/100 mL进行正交试验.
DH是衡量蛋白中肽键水解程度的指标,TCA可溶性氮是衡量蛋白水解成小分子肽的指标,二者有一定关系,但又不完全一样,2 个指标与血红蛋白的水解程度呈正相关.血红蛋白是由4 个肌红蛋白构成的四级结构,肌红蛋白呈球状,内部包裹着疏水性的血红素及疏水性肽段.血红素在酸性溶液中溶解度极低,加热能提高疏水相互作用,还能让蛋白内部肽段变性沉淀,因此用加热酸沉的方法使血红素及其相连的肽段在疏水相互作用下彼此聚集,形成较大颗粒,产生沉淀从而去除,达到脱色目的.很明显,蛋白酶水解血红蛋白时,水解程度越高,疏水性的血红素及肽段暴露越充分,沉淀也就越彻底,水解液中血红素残留量就会越低.因此血红素残留量不仅是衡量脱色效果的指标,也间接反映了血红蛋白DH,与DH呈负相关.
从上述单因素试验结果得出,胰蛋白酶的酶解脱色效果优于碱性蛋白酶,这与孔卓姝等[39]用蛋白酶制备猪血红蛋白抗氧化肽的强弱顺序（胃蛋白酶>胰蛋白酶>木瓜蛋白酶>中性蛋白酶>碱性蛋白酶>复合蛋白酶>风味蛋白酶）一致,因此选择胰蛋白酶继续进行正交试验.
2、2 猪血红蛋白酶解脱色正交试验结果与分析
由表1极差分析可知,猪血红蛋白酶解效果影响因素的主次顺序为B>D>A>C,即酶解温度>底物质量浓度>酶底比>pH值,因素水平最优组合为A3B2C2D3,即酶底比7 500 U/g、酶解温度45 ℃、pH 7.5、底物质量浓度8 g/100 mL.根据正交试验所得最佳因素水平组合进行3 次验证实验,测得猪血红蛋白酶解液DH为25.67%,TCA可溶性氮含量为80.05%,血红素残留量为18.34%.DH和TCA可溶性氮含量高于正交试验中所有组合,而血红素残留量则几乎低于正交试验中所有组合,表明所选因素水平组合的酶解效果最好.酶解脱色后的血红蛋白多肽粉为淡、不定型固体粉末,并有特殊的肉香味,经凯氏定氮检测,其蛋白含量为83.17%.
2、3 猪血红蛋白多肽分子质量分布
按胰蛋白酶最佳水解条件制备得到猪血红蛋白多肽后,采用高效液相色谱法测定水解物分子质量分布范围,结果如图5及表2所示.
由表3可知：分子质量大于5 000 Da的肽段（即39.0 肽以上的小肽）非常少,只占多肽总量的0.12%;分子质量1 000～5 000 Da的肽段（即7.8～39.0 肽之间的小肽）占多肽总量的5.68%;分子质量小于1 000 Da的肽段（即8.0 肽以下的小肽）最多,占多肽总量的94.20%,较宋思佳等[40]用复合蛋白酶酶解所得猪血红蛋白产物的小分子肽多（小于1 000 Da的肽段超过72%）.由此可见,猪血红蛋白胰蛋白酶水解物中以小肽居多.
3 结 论
比较胰蛋白酶和碱性蛋白酶酶解猪血红蛋白的脱色效果,结果表明：胰蛋白酶酶解液DH及TCA可溶性氮含量更高,血红素残留量更低,因此有更好的酶解脱色效果;通过正交试验得到胰蛋白酶最佳酶解条件为酶底比7 500 U/g、酶解温度45 ℃、pH 7.5、底物质量浓度8 g/100 mL,该条件下酶解液DH为25.67%,TCA可溶性氮含量为80.05%,血红素残留量为18.34%.
猪血红蛋白多肽分子质量分布检测结果表明：分子质量大于5 000 Da的肽段（即39.0 肽以上的小肽）占多肽总量的0.12%;分子质量1 000～5 000 Da的肽段（即7.8～39.0 肽之间的小肽）占多肽总量的5.68%;分子质量小于1 000 Da的肽段（即8.0 肽以下的小肽）最多,占多肽总量的94.20%.猪血红蛋白多肽粉中TCA可溶性氮含量为80.05%的蛋白占猪血红蛋白多肽蛋白含量的96.25%,这与分子质量分布结果比较符合.
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总结：上文汇总，上述文章是关于蛋白酶方面的论文题目可用于相关论文提纲和胰蛋白酶文献综述的参考文献.
蛋白酶引用文献:
[1] 密蒙花和基质金属蛋白酶专科毕业论文范文 密蒙花和基质金属蛋白酶方面论文范文数据库2000字
[2] 蛋白酶的检测技术论文
