《外源刀豆凝集素对菲律宾蛤仔免疫机能的影响》
该文是有关凝集素和蛤仔学士学位论文范文与免疫有关硕士毕业论文范文.
摘 要为了解外源刀豆凝集素对菲律宾蛤仔免疫因子的影响,开展了不同浓度刀豆凝集素对菲律宾蛤仔血细胞吞噬活性、溶菌酶（LSZ）、碱性磷酸酶（P）和超氧化物歧化酶（SOD）的影响研究.结果表明,投喂刀豆凝集素后第1、3、4、6、7天,菲律宾蛤仔吞噬细胞活性显著高于对照普通养殖（P<0.05）;投喂5 μg/L刀豆凝集素后第4、6、7天,菲律宾蛤仔溶菌酶含量显著高于对照普通养殖（P<0.05）;投喂刀豆凝集素后第1～7天,菲律宾蛤仔碱性磷酸酶活性显著高于对照普通养殖（P<0.05）;投喂5 μg/L刀豆凝集素后第3、7天,菲律宾蛤仔的超氧化物歧化酶活性显著高于对照普通养殖（P<0.05）.刀豆凝集素在第2～5天对菲律宾蛤仔免疫力具有很大的促进作用,3 μg/L刀豆凝集素效果最佳,第7天后投喂5 μg/L刀豆凝集素效果最佳.
关键词菲律宾蛤仔;刀豆凝集素;免疫机能
中图分类号S917文献标识码A
文章编号 1007-5739（2020）08-0221-03开放科学（资源服务）标识码（OSID）
AbstractIn order to understand the effect of exogenous concanalin on the immune factors of Ruditapes philippinarum,the effects of different concentrations of concanalin on blood cells phagocytic activity,lysozyme（LSZ）,alkaline phosphatase（APK）and superoxide diutase（SOD）of R. philippinarum were studied.The results showed that on 1st,3th,4th,6th and 7th day after feeding concanalin,the phagocytic activity of R. philippin-arum was significantly higher than the control（P<0.05）;On 4th,6th and 7th day after feeding 5 μg/L concanavalin,the LSZ content of R. philippin-arum was significantly higher than the control（P<0.05）;From 1th to 7th day after feeding concanavalin,the APK activity of R. philippinarum was significantly higher than the control（P<0.05）;On 3th and 7th day after feeding 5 μg/L concanavalin,the SOD activity of R. philippinarum was significantly higher than the control（P<0.05）.Concanavalin had a great effect on promoting the immunity of R. philippinarum from the 2nd to the 5th day,the best concentration of concanavalin was 3 μg/L.The best concentration of feeding concanavalin was 5 μg/L after the 7th day.
Key wordsRuditapes philippinarum;concanalin;immune function
菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）隶属于软体动物门（Mollusca）双壳纲（Bivalvia）帘形目（Venerida）帘蛤科（Ve-neridae）蛤仔属（Ruditapes）[1],因其肉味鲜美、营养丰富,富含维生素及矿物质,深受人们的喜爱.菲律宾蛤仔为我国四大养殖贝类之一,年产量约300万t,约占世界蛤仔总产量的90%[2].随着人民生活水平的提高,市场对菲律宾蛤仔的需求逐年增加.
凝集素是指从植物、无脊椎动物和高等动物中提取的糖蛋白或结合糖蛋白,因其能凝集红血球（含血型物质）而得名.至今发现的植物凝集素有1 000种以上[3],豆科植物凝集素种类逾600种,其中逾70种已被分离纯化[4].植物凝集素不仅具有免疫反应、信号转导、植物防御等诸多重要作用,同时具有细胞凝集、抗病毒、抗真菌及诱导细胞凋亡或自噬等多种能力.近年来,植物凝集素作为一种免疫增强剂已在水产动物中广泛应用.张 静等[5]初步研究发现,凝集素对增强鲫的非特异性免疫力具有重要作用.李丹彤等[6]研究发现,裙带菜凝集素对日本对虾免疫机能具有一定的促进作用.熊川男等[7]研究发现,凝集素对海参免疫因子有一定的影响.李丹彤等[8]研究了不同海藻凝集素对鲤免疫活性物的诱导作用.关于凝集素对贝类的免疫机能影响的相关报道较少[9],本试验研究刀豆凝集素对菲律宾蛤仔免疫相关指标的影响,以期为经济贝类的苗种繁育、养殖及净化免疫促进剂的研发提供参考.
1材料与方法
1.1试验材料
供试材料为大连金州野生群体蛤仔.将蛤仔运输到实验室后,暂养3 d,暂养水温为15 ℃,pH值為8.0,盐度为30.蛤仔壳长平均规格为（3.56±0.36）cm.将刀豆凝集素配置为浓度为5 mg/L的母液.
1.2试验方法
试验设3个处理,即将蛤仔分别养殖在刀豆凝集素浓度为3 μg/L（A）和5 μg/L（B）的过滤海水中,并设置普通养殖为对照（CK）.试验水槽体积为30 L,每天全量换水1次,每天投喂金藻与小球藻,投喂量分别为25万个/mL,每天取样1 次,用液氮速冻后放入-80 ℃冰箱保存,试验持续7 d.
1.3调查内容与方法
分别测定各处理的细胞总数、溶菌酶酶活性、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶.
1.3.1血细胞总数测定.按2%氯化钠、1%乙酸钙和4%甲醛配制成Baker′s formol calcium（BEC）固定液,吸取30 μL血淋巴细胞样品加入到30 μL BFC固定液中.将固定的样品放置于血球计数板,在10倍光学显微镜（CX21FS1）下观察计数.
1.3.2血细胞吞噬活性.血细胞吞噬活性采用Hannam等[10]的方法,首先取50 μL血淋巴细胞样品加入到96孔酶标板中,将酶标板于4 ℃孵育1 h,孵育后取100 μL贝类生理盐水冲洗黏附血细胞,重复清洗2次,加入50 μL中性红染过的酵母悬液（50×107个/mL）,于20 ℃孵育30 min之后,加入100 μL BFC终止反应.使用生理盐水（灭菌的海水）洗去多生物大分子、无机物颗粒、细菌、真菌、自身的坏死细胞及细胞碎片等[11-14].关于凝集素能够促进水产动物的血细胞的吞噬活性已有较多报道,有研究表明,龙虾的凝集素能够促进血淋巴细胞的吞噬功能.彭其胜等[15]对中国对虾血淋巴凝集素的血凝活性与促噬活性研究发现凝集素对血细胞吞噬活性具有促进作用.李丹彤等[6]在裙带菜对日本对虾影响研究中表明,日本对虾吞噬活性在第3天时达到最高,指出植物凝集素在第3天时对无脊椎动物吞噬细胞影响最大.本研究中,在蛤仔养殖水体中加入3 μg/L和5 μg/L刀豆凝集素可在早期促进蛤仔血细胞吞噬活性,说明外源刀豆凝集素对蛤仔具有一定的免疫促进作用.
溶菌酶可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白等形成复盐,进而使病毒失活.因此,该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用[12].本研究中,刀豆凝集素处理在第4天与第6天对溶菌酶活性的影响效果最显著,其中5 μg/L刀豆凝集素处理明显高于3 μg/L刀豆凝集素处理、普通养殖对照,前期凝集素对蛤仔中溶菌酶活性促进效果并不明显,而凝集素处理第4天时效果最佳,并且5 μg/L刀豆凝集素处理效果高于3 μg/L刀豆凝集素处理.在外源刀豆凝集素处理蛤仔的条件下,蛤仔的溶菌酶活性基本呈下降趋势,这与张 静等[5]在裙带菜凝集素对鲫的免疫诱导研究中得出凝集素作用下溶菌酶活性呈降低趋势的结果一致.
碱性磷酸酶是一种重要的代谢调控酶,直接参与磷酸基团的转移和机体白质的合成,也是溶酶体酶的重要组成部分[14-17].超氧化物歧化酶是重要的抗氧化酶之一,在清除自由基、预防生物分子损伤等方面有重要作用,也与生物的免疫水平密切相关[15-21].Rawal等[22]报道了阿米巴Gal/GalNAc专一凝集素对MAPK 激酶途径有激活作用.李丹彤等[20]在对3种海藻凝集素对刺参组织超氧化物歧化酶活性的影响研究中发现,裙带菜凝集素、孔石莼凝集素处理5 d后,刺参体内超氧化物歧化酶活性均呈现上升趋势.本研究结果表明,刀豆凝集素对蛤仔中碱性磷酸酶具有很大的促进作用,3 μg/L刀豆凝集素处理后蛤仔体内的碱性磷酸酶活性较高.投喂刀豆凝集素第2天时,3 μg/L与5 μg/L刀豆凝集素处理超氧化物歧化酶活性已明显高于对照普通养殖,说明外源刀豆凝集素对蛤仔具有一定的免疫促进作用.
本研究结果表明,投喂刀豆凝集素后2～5 d,刀豆凝集素对蛤仔免疫促进效果最佳,在养殖水体中投放3 μg/L和5 μg/L外源刀豆凝集素对蛤仔均有一定的免疫促进作用.
4参考文献
[1] 张国范,闫喜武.蛤仔养殖学[M].北京：科学出版社,2010.
[2] 丁鉴锋,杨霏,闫喜武,等.不同壳色菲律宾蛤仔免疫机能的比较研究[J].大连海洋大学学报,2012,27（5）：411-416.
[3] TEIXEIRA-S?魣 D M,REICHER F,BRAGA R C,et al.Isolation of a lectin and a galactoxyloglucan from Mucuna sloanei seeds[J].Phytochemistry,2009,70（17/18）：1965-1972.
[4] SHARON N,LIS H.Legume lectins：a large family of homologous proteins[J].FASEB J,1990,14（3）：198-208.
[5] 张静,李丹彤,范庆华,等.裙带菜凝集素对鲫的免疫诱导[J].大连水产学院学报,2006,21（2）：193-195.
[6] 李丹彤,张静,陈国栋,等.裙带菜凝集素对日本对虾非特异性免疫因子的影响[J],大连水产学院学报,2009,24（3）：90-94.
[7] 熊川男,李伟,白雪芳,等.凝集素作为海参免疫增强剂在人工养殖海参中的应用[J].饲料科学,2005,26（18）：33-35.
[8] 李丹彤,袁美云,林春江,等.不同海藻凝集素對鲤免疫活性物的诱导[J].辽宁师范大学学报（自然科学版）,2006,29（3）：348-351.
[9] 丁鉴锋,闫喜武,赵力强,等.海洋污染物对菲律宾蛤仔的免疫毒性[J].生态学报,2013,33（17）：5419-5424.
[10] HANNAM M L,BAMBER S D,MOODY J A,et al.Immune function in the arctic scallop,chlamys islandica,following dispersed oil exposure[J].Aquatic Toxicology,2009,92（3）：187-194.
[11] 申明,于志洋.溶菌酶与抗菌肽融合蛋白在整形创口愈合未来发展趋势探讨[J].中国医疗美容,2013（3）：108-109.
[12] CHENG T.BivaLves：invertebrate BLood CeLLs[M].New York：Inverteb-rate Blood,1981：233-300.
[13] 陈昌福,陈萱,陈超然,等.水产甲壳动物的免疫防御机能及其免疫预防研究进展[J].华中农业大学学报,2003,22（2）：197-203.
[14] HULTMARK D.Insect immunity：Purification and properties of three inducibLe bactericidal proteins from hemoLymph of immunizedpu-pae of HyaLophoraceropia[J].Eur J Biochem,1980,106：7-16.
[15] 彭其胜,郭文场,杨振国,等.中国对虾血淋巴凝集素的血凝活性与促噬活性[J].水产学报,2001（3）：197-202.
[16] 魏云波,王兴民,张瑞凌,等.三丁基氧化锡对菲律宾蛤仔免疫损伤机理的研究[J].现代农业科技,2011（23）：333.
[17] 随建强.菲律宾蛤仔碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究[D].青岛：中国海洋大学,2012.
[18] 胡莹莹,李爱,叶赛,等.氯霉素对菲律宾蛤仔的急性和亚急性毒性作用[J].中国环境科学,2006,26（增刊1）：125-128.
[19] 王文琪,徐申波,张玉娜,等.菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）血细胞分类及其功能初探[J].青岛农业大学学报（自然科学版）,2006,23（3）：165-169.
[20] 李丹彤,王红,郝杰,等.三种海藻凝集素对刺参组织免疫酶SOD、PO活性的影响[J].信阳师范学院学报（自然科学版）,2014,27（1）：34-37.
[21] HALL J L,ROWLANDS D T.Heterogeneity of lobster agglutinins.II.Sp-ecificity of agglutinin-erythrocyte binding[J].Biochemistry,1974,13（4）：828-832.
[22] RAWAL S,MAJUMDAR S,VOHRA H.Activation of MAPK kinase pat-hway by Gal/GalNAc adherence lectin of E. histolytica：gateway to host response[J].Molecular and Cellular Biochemistry,2005,268（1/2）：93-101.
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