简介:本文是有关四逆散和十二指肠专科毕业论文范文和细胞方面毕业论文模板范文.
摘 要 目的：探讨四逆散对功能性消化不良（FD）大鼠十二指肠杯状细胞及黏蛋白2（MUC2）表达的影响.方法：将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组及四逆散观察组,每组10只.采用幼年碘乙酰胺灌胃联合夹尾应激刺激方法诱导FD动物模型,正常组及模型组给予生理盐水灌胃,四逆散观察组予四逆散中药水煎剂灌胃.取大鼠局部十二指肠组织进行HE染色观察以十二指肠组织基本形态,AB-PAS染色观察杯状细胞数量情况,免疫组织化学（IHC）观察MUC2蛋白表达情况,定量PCR（qPCR）检测MUC2 mRNA表达情况.结果：HE染色显示3组大鼠十二指肠基本形态未见明显异常;与正常组比较,模型组大鼠十二指肠杯状细胞数量明显减少;MUC2 mRNA及免疫阳性表达均明显低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,四逆散观察组以上指标均较模型组明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）.结论：四逆散可能通过增加FD大鼠杯状细胞数量和增加MUC2的表达,改善十二指肠黏液屏障,从而对FD起到治疗作用.
关键词 功能性消化不良;四逆散;十二指肠;杯状细胞;黏蛋白2;黏液屏障;大鼠;机制研究
Abstract Objective：To investigate the effects of Sini Powder on goblet cells and the expression of mucin 2 （MUC2） in the duodenum of functional dyspepsia （FD） rats.Methods：A total of 30 SD rats were randomly divided into 3 groups with 10 rats in each group,including a control group,a model group and a Sini Powder treatment group.The FD animal model was induced by intragastric juvenile iodoacetamide gage combined with tail clip stress stimulation.Normal group and model group were given intragastric saline.The Sini Powder treatment group rats was given Chinese medicine decoction of Sini Powder for intragastric administration.The local duodenal tissue of rats was taken for HE staining to observe the basic morphology of the duodenal tissue,for AB-PAS staining to observe the number of goblet cells,for immunohistochemistry （IHC） to observe the expression of MUC2 protein,for quantitative PCR （qPCR） detection of MUC2 mRNA expression.Results：HE staining showed that the basic morphology of the duodenum of rats was normal in the 3 groups.Compared with the normal group,the number of duodenal goblet cells in the model group was significantly reduced; MUC2 mRNA and immunopositive expression were significantly lower than the control group （P<0.01,P<0.01）,the difference was statistically significant.Compared with the model group,the above indexes of the Sini Powder treatment group were significantly higher than the model group （P<0.01,P<0.05）,the difference was statistically significant.Conclusion：Sini Powder can restore mucus barrier by increasing the number of goblet cells in duodenum,regulating the expression of MUC2 so as to treat FD.
Keywords Functional dyspepsia; Sini Powder; Duodenum; Goblet cell; MUC2; Mucus barrier; Rat; Mechanis research
中圖分类号：R289.4;R573.9文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.11.012
功能性消化不良（Founctional Dyspepsia,FD）是消化科最常见的疾病之一,发病率居高不下[1].现代医学治疗FD多以对症治疗为主,包括抑酸、促动力、抗抑郁等治疗尚不能满足临床需要.四逆散出自《伤寒论》,具有透邪解郁、调和肝脾之效,是临床治疗FD的常用方剂.前期研究发现[2],四逆散能够修复FD大鼠十二指肠黏膜屏障功能,调节上皮紧密连接,改善十二指肠微炎性反应状态.杯状细胞及其分泌的黏蛋白2（Mucin 2,MUC2）是十二指肠上皮化学及机械屏障的重要组成部分,对维持十二指肠屏障的完整性对十二指肠的正常功能具有重要意义[3].但四逆散对十二指肠杯状细胞及MUC2的影响尚未可知.本研究从观察十二指肠杯状细胞数量及MUC2表达入手,探讨四逆散治疗FD可能的靶点及机制.
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物
选取健康雄性SD大鼠30只,7日龄,SPF级,由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心,饲养于于中国中医科学院基础医学研究所屏障级实验动物室.饲养环境：恒湿（65%～70%）、恒温（22±1）℃,12 h光照/黑暗循环,所有动物均自由饮食饮水.适应性饲养3 d后开始造模.
1.1.2 药物
四逆散（由柴胡、白芍、枳实、甘草组成）,购买于首都医科大学附属北京中医医院草药房.按照人与大鼠用药剂量换算方法[4],以临床等效剂量作为治疗FD动物模型用药剂量,制备水煎剂,生药含量0.42 g/mL.
1.1.3 试剂与仪器
Trizol（美国Ambion公司,货号：15596026）、GoScript Reverse Transcription System（美国Promega公司,货号：A5001）、GoTaq Qpcr Master Mix（美国Promega公司,货号：A6001）、AB-PAS染液（武汉赛维尔生物科技有限公司,货号：G1049）、免疫组织化学试剂（长沙伯瑞克公司,货号：BIH0003）、MUC2抗体（博士德生物工程有限公司,货号：BM5029）、HE染液（武汉赛维尔生物科技有限公司,货号：G1005-500）、通用型组织固定液（合肥Biosharp公司,货号：BL539A）、粘附载玻片（江苏世泰实验器材有限公司,188105型）、盖玻片（江苏世泰实验器材有限公司,10212440C型）、石蜡切片机（德国Leica公司,RM2255型）、显微镜（德国Carl Zeiss公司,Axio Scope A1）、石蜡包埋机（德国Leica公司,EG1150C型）、摊片机（德国Leica公司,HI1210型）、紫外分光光度计（德国eppendorf公司,6138000018型）、定量PCR检测仪（美国Bio-Rad公司,CFX96型）、高通量组织研磨仪（深圳信仪测控技术有限公司,Scientz-48型）等.
1.2 方法
1.2.1 分组与模型制备
将10日龄大鼠随机分为正常组、FD模型组和四逆散观察组,每组10只.10日龄起正常组予以2%蔗糖溶液灌胃;FD模型大鼠采用幼年碘乙酰胺灌胃联合夹尾应激刺激法造模[5].模型组和四逆散观察组予0.1%的碘乙酰氨与2%的蔗糖混合液灌胃,均为1次/d,持续6 d.至7周龄起,进行夹尾刺激.大鼠每笼5只,以长海绵钳夹大鼠远端1/3处尾巴,使其激怒,并与同笼大鼠厮打以激怒全笼.持续刺激30 min/次.刺激1次/4 h,3次/d,连续造模7 d.
1.2.2 给药方法
夹尾刺激7 d后,四逆散观察组予四逆散水煎剂灌胃（1 mL/100 g）,正常组与FD组予以等容积0.9%生理盐水灌胃,均为1次/d,共灌胃7 d.四逆散观察组与FD模型组灌胃期间继续予以夹尾刺激.
1.2.3 检测指标及方法
1）HE染色观察十二指肠组织形态：
剪取大鼠十二指肠组织,于4%多聚甲醛中固定,脱水、包埋、切片（厚度8 μm）;常规脱蜡至水,依次经苏木精及伊红染液染色,二甲苯透明,中性树脂封片,于显微镜下拍照观察.
2）AB-PAS染色法观察杯状细胞：
取大鼠十二指肠组织石蜡切片,常规脱蜡至水,依次经阿利新蓝染液浸染、0.5%高碘酸水溶液氧化、雪夫试剂暗处浸染,经苏木精复染核,盐酸乙醇分化,氨水返蓝,二甲苯透明后中性树胶封固,于显微镜下观察拍照.
3）免疫组织化学法观察MUC2蛋白表达：
与大鼠十二指肠组织石蜡切片常规脱蜡水化,柠檬酸钠溶液抗原修复,滴加过氧化物酶阻断剂,封闭,一抗孵育,二抗孵育,DAB显色,苏木精复染,常规脱水、透明,中性树胶封固,于显微镜下观察拍照.采用Image pro plus软件分析各组照片的平均光密度值（IOD/Area）.
4）qPCR检测MUC2 mRNA表达：
取大鼠十二指肠组织,trizol法提取组织总RNA,将RNA反转录为cDNA,随后进行qPCR反应.采用2-△△Ct进行RNA相对表达量分析.MUC2上游引物：5′-GGCTCTGCTCTCTGTGTTATAG-3′,下游引物：5′-CAGTTTGGGAAGAAGGTAGGG-3′;β-actin上游引物：5′-AGTTGCGTTACACCCTTT C-3′,下游引物：5′-CACCTTCACCGTTCCAGT-3′.
1.3 统计学方法
采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析.计量资料以均数标准差（±s）表示,采用单因素方差分对各组数据进行比较.以P<0.05为差异有统计学意义.
2 结果
2.1 HE染色观察十二指肠组织形态
HE染色结果显示,各组大鼠十二指肠基本形态均未见明显异常.见图1.
2.2 3组大鼠十二指肠AB-PAS染色
与正常组比较,模型组大鼠十二指肠内杯状细胞数量明显减少;经四逆散治疗后,观察组十二指肠杯状细胞数量明显上升.见图2.
2.3 3组大鼠MUC2 mRNA水平
模型组大鼠十二指肠局MUC2 mRNA相对表达量明显低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）,观察组MUC2 mRNA水平较模型組明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）.见表1.
2.4 3组大鼠十二指肠MUC2蛋白表达
与正常组比较,模型组大鼠十二指肠MUC2蛋白平均光密度值（IOD/Area）明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,观察组大鼠十二指肠MUC2蛋白平均光密度值明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）.见图3及表2.
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（2019-04-20收稿 責任编辑：杨觉雄）
总结：本文点评，上述文章是一篇适合不知如何写细胞方面的四逆散和十二指肠专业大学硕士和本科毕业论文以及关于四逆散和十二指肠论文开题报告范文和相关职称论文写作参考文献资料.
细胞引用文献:
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